| 研究概要 |
本研究は、CRAM、Fes/Fps、そして新しく同定されたCRAM結合核移行性GTPase、CRAGの役割について解析することにより、セマフォリンおよび神経回路形成の基本的情報伝達システムを明らかにすることを目的としている。以前の研究によりCRAMを神経細胞に強制発現させると、セマフォリンによる成長円錐の崩壊が完全に抑制されたことより、CRAMがセマフォリンシグナル伝達を負に制御していることが示された。このCRAMによるセマフォリンシグナル抑制の分子メカニズムを明らかにすることを本研究では計画した。そのためにまずCRAMを強制発現したマウス及びラット神経初代培養細胞と強制発現を行っていないコントロール細胞におけるセマフォリン応答の違いを比較検討した。具体的な実験としては、セマフォリン受容体の発現パターンと活性化等に着目し、それらの違いがあるかどうかを免疫組織染色と免疫沈降法を用いて解析を行った。また、受容体下流のシグナル伝達としてRedox変化、CRMPの挙動やリン酸化に変化がないかどうかを検討した。セマフォリン刺激以外としては酸化ストレス刺激などについても比較検討を行った,これらの実験の結果、様々な刺激後に起こるCRAMの修飾については興味深いデータが得られており、さらなる解析が必要である。さらに過剰発現系の実験のみならず、RNAi法を川いてCRAMをノックダウンし、その影響を観察した。
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