| 研究概要 |
本研究では、研究代表者らのグループで取り組んでいるアグロバクテリウムを介したオオムギ形質転換系を用いて、トウモロコシのトランスポゾンAc/Dsを用いたオオムギミュータントパネルの構築を目的とする。単一もしくは少数コピーのDs挿入断片を持つオオムギ系統を作出し,これらを別に作出するAcトランスポゼース(AcTPase)を恒常的に発現する形質転換オオムギとの交配により,一回の交雑に由来する複数の独立したタギング系統の作出を計画している.
平成19年度は,昨年度構築したDs末端逆位反復配列内に選抜マーカー(bar)遺伝子を導入したプラスミドを,安定した形質転換効率が報告されているバイナリーベクターpWBVec8(Wang, et al., 1998)に導入したコンストラクトを用いて,胚培養を介した形質転換でオオムギへの導入を試みた.醸造用オオムギ品種'Golden Promise'の未熟胚にアグロバクテリウムを用いて感染させ,マーカー抗生物質耐性カルスの形成および植物体の再生を試みた.これまでのところおよそ5,000の未熟胚に感染させ,選抜マーカーであるハイグロマイシン耐性を示すカルスを選抜中である.しかしながら,安定した選抜カルスの誘導には至っていない,培養条件等の最適化のために,pWBVec8以外のベクター(pANDA, pBI121)を用いたコンストラクトの構築,作製したコンストラクトをシロイヌナズに導入してコンストラクト自体の有効性の確認,パーティクル・ガン法による形質転換体作製等,種々の実験を同時並行で進めている.これらの実験を通して安定したオオムギ形質転換のための条件を見出し,次年度のDs導入植物体の作製を目指していく予定である.
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