|
Acidovorax属最近KKS102カブのPCB分解オペロン(bphオペロン)の転写に関わるpEプロモーターからの転写が、コハク酸、酢酸、フマル酸といって有機酸の存在によって抑制されるメカニズム、すなわちカタボライト調節のメカニズムを解明を目的に研究を実施した。pEプロモーターの顆粒にlacおよびgfpの遺伝子を連結しこれをKKS株ゲノムに1コピーで組むことでpEプロモモーターの發言量を定量するためのアッセイ系を構築した。この株に対してトランスポゾンミュータジェネシスを行ったところコハク酸の存在の有無によらず高いLacZおよびGFP活性を示すミュータントを取得した。このミュータントのトランスポゾン挿入部位を解析したところ、グルタミンシンテースの遺伝子に挿入されていた。グルタミンシンテースはTCAサイクルとアミノ酸成合成経路をつなぐ重要な遺伝子であり、カタボライト調節には菌体内の物質代謝が重要な役割を果していることが示唆された。
すでに取得されていたカタボライト調節に関わる二成分調節系のレスポンスレギュレーターであるBphQについてその発現量の変動をウエスタンブロッティングにより解析した。その結果、コハク酸の添加によりBphQ発現量の減少がみられた。bhpQの転写量はコハク酸によって変化しないことを考え合わせると、カタボライト調節にはBphQの安定性が関わっていることが推測される。
カタボライト調節についてさらに抑制を起す炭素源を探索したところ、グルタミン酸を強い抑制効果を持つ炭素源として同定した。
|
