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申請者は新規のRab5GEFであるRINファミリーの機能解析を進めており、本研究ではRINファミリーによるRab5ファミリーの活性化機構解明を目的として以下の知見を得た。
1、RINファミリーとRab5ファミリー間の作用に関する生化学的特性の解析
細胞内におけるRINによるRab5ファミリーのGEF活性を、[32Pi]により標識した培養細胞におけるRab5ファミリーと結合するGTP/GDPの比率変化を指標に検討した。その結果RIN2、RIN3は他のRab5GEFと異なりRab22やRab31のGTP結合量を特異的に増大させた事から、細胞内でRIN2、RIN3がRab22、Rab31のGEFとして機能する事を新たに見出した。
2、Rab5ファミリーの細胞内局在の検討
Rab22が局在している細胞内小器官を同定するために各種オルガネラマーカーにより免疫染色したところ、Rab22は初期エンドソームおよび微小管に局在する事を明らかとした。また、RIN2、RIN3とRab22、Rab31との共発現によりRab22、Rab31が局在している小胞が巨大化する事、さらにこの巨大化がRIN2、RIN3のGEF活性に依存的であることも同時に見出しだ。またTime lapse imagingによりRIN3とRab22、31が細胞内でダイナミックに動くことを見出した。
以上の結果より、RIN2、RIN3がRab5のみならずRab22、Rab31のGEFとしても機能することで複雑なエンドサイトーシスを巧みに調節している可能性が示された。
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