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昨年度までの研究により、胞巣状軟部肉腫特異的キメラ遺伝子ASPL-TFE3は細胞の核に局在し、転写因子として機能する可能性が示唆された。本年度は、ASPL-TFE3の転写活性能および、胞巣状軟部肉腫特異的遺伝子発現への影響について解析を行い、以下の研究成果を得た。
1、ASPL-TFE3キメラ遺伝子が転写活性化能を持つことを明らかにした。
ASPL-TFE3の転写活性化能をルシフェラーゼアッセイにより解析した結果、ASPL-TFE3存在下ではTFE3標的配列の転写活性が〜10倍程度上昇し、ASPL-TFE3が転写活性化能を持つことが証明された。
2、ASPL-TFE3転写標的因子を同定した。
ASPL-TFE3導入および非導入培養細胞におけるTFE3転写標的因子群の発現量をウエスタンブロット法により比較検討した。その結果、ASPL-TFE3導入によりサイクリンEの発現に変化が認められた。
3、胞巣状軟部肉腫症例でASPL-TFE3標的因子の高発現を確認した。
ウエスタンブロット解析および免疫組織化学染色により、胞巣状軟部肉腫症例においてASPL-TFE3標的因子であるサイクリンEが高発現していることを見出した。
以上より、ASPL-TFE3は転写活性能を有しており、転写因子として肉腫特異的遺伝子発現制御に寄与することが示された。本研究の成果より、胞巣状軟部肉腫病態におけるASPL-TFE3の重要性が示唆され、今後のさらなる機能解析の必要性が推察された。
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