| 研究概要 |
リアルタイムPCR法を用いてreverse transcription, integrationの各ステップがNAF-1によって影響を受けるかどうか検討を行ったところ、NAF-1はreverse transcription効率に影響を与えないが、integration効率を低下させることが明らかとなった。さらにNAF-1は2LTR DNAの量も減少させることから、核移行のステップがNAF-1の標的である可能性が示唆された。
さらにNAF1に対するshRNA発現ベクターを作成し、NAF1をknock downした細胞(Jurkat/NAFi,293/NAFi)の樹立に成功した。endogenous NAF1の発現レベルを確認するにはanti-NAF1抗体が必要であるが、この目的には研究代表者が作成した抗体が非常に有効であった。現在、樹立したJurkat/NAFi,293/NAFiを用いてHIV-1のライフサイクルにおける影響を解析しているところである。
また、anti-NAF1抗体を用いて免疫沈降を行い、SDS-PAGEを行ったところ、特徴的な複数のバンドが確認された。これらのバンドをゲルから切り抜き、タンパク質をトリプシン処理した後にMALDI-TOF-MSによって質量分析を行ったところ、数種類のタンパク質が同定された。現在、免疫沈降物に対してウエスタンブロットを行うなど、さらに詳細な解析を行っているところである。
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