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我々は当該研究において、純化した初代肝幹/前駆細胞を用いて肝細胞分化に関わる分子機構を解析し、その結果をもとに、致死的肝疾患モデルマウスを肝幹細胞の移植によって救命する細胞移植モデルを開発する研究を行い、今年度の成果として下記を得た。
1.マウス肝幹/前駆細胞の分離、分化誘導培養系の確立・改良:研究代表者はマウス胎児肝からFACSによって純化した肝幹/前駆細胞を培養し、増殖・分化を誘導する系をpreliminaryに確立していたが、条件検討を行って培養系を改良し、安定なものとした。現在の培養系によって、RT-PCRでの遺伝子発現の変化を明瞭に検出できているため、これを用いて以下の研究を行った。
(2).肝細胞分化の分子機構の探索:dominant negative formのTcf-4(dnTcf-4)をレトロウイルスベクターで肝前駆細胞に強制発現させて終末分化機構への影響を解析したところ、dnTcf-4群では肝細胞への分化と増殖の双方が明瞭に抑制された(第13回肝細胞研究会などで報告)。さらに現在はWnt経路以外にも、肝細胞の分化制御に関わる可能性のある分子を前記の実験系を用いて順次スクリーニングしている。
(3).肝不全モデルマウスへの細胞移植実験系の確立:既に肝不全をモデル化したFAH欠損マウスへの移植系を確立している。同時に、野生型マウスを用いた細胞移植実験系の確立も同時に行ってきたが、放射線照射と肝切除を組み合わせた前処置によって、野生型マウスにも細胞移植の効果を判定できる系を確立した。
これらの結果に基づいて、肝幹/前駆細胞に対してレトロウイルスベクターでdnTcf-4を強制発現させ、その細胞を肝不全マウスに移植することで救命効果の差について検討し、Wnt経路と肝細胞分化の関係をさらに解析する予定である。
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