| 研究概要 |
新規リン調節ペプチドホルモン様物質(LPP)候補ペプチド評価系の確立
腸管より分泌される新規リン調節ペプチドホルモン様物質(LLP)候補分子は腎臓でのリン再吸収を調節し、血中リン濃度をコントロールすると想定している。まず、シグナルシークエントラップ法により、得られたLLP候補分子を評価する培養細胞系の確立に取り組んだ。リン再吸収機能を調節するFGF23をOK細胞,HeLa細胞に導入した。また、FGF23のレセプターとしてFGFRと複合体を形成するKlothoを恒常的に発現した培養細胞系を構築した。これらの細胞を使いLLP候補分子の添加実験を行い、リン輸送活性変化、ナトリウム依存性リン輸送担体の局在変化を調べる。
血清中のLLP候補分子の探索
腎不全モデルラットを作成し、低リン食投与により、血清リン濃度の改善効果を検討する改善効果の高い個体N=3以上の血清を採取し、IgG除去処理、及び分子量10kD以下に分画した。次ににショットガン法にてAXIMA-CFRレーザーイオン化飛行時間型質量分析装置(MALDI-TOFMS)を用いて質量分析を行い、LPPの候補ペプチドのアミノ酸配列を同定する。
シグナルシークエンストラップ法を用いた、LLP候補分子のスクリーニング
腎不全ラットにコントロール食、低リン食 低リン/低カルシウム食で飼育したラット腸管cDNAを用い、サブトラクションを行い、腎不全ラットに低リン食を与えた群のみ変化するcDNAプールを作製した。サブトラクション後のcDNAをシグナルシークエンストラップ用カセットに挿入しライブラリーを構築した。同様に培養細胞である、マウス腸管分擁細胞(STC-1細胞)を培養液中のリン濃度を3群に分け培養後、上記に示した方法と同様にライブラリーを構築した。現在これらのライブラリーを培養細胞に導入してスクリーニング中である。
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