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筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、系統的な運動ニューロン死により進行性の筋力低下と筋萎縮をもたらす致死的な神経変性疾患である。予後がきわめて不良にもかかわらず有効な治療法は確立していない。本研究は、系統的な運動ニューロン変性に反応して脊髄に誘導されるニューロン新生をラット家族性ALSモデル動物で検索することを目的とした。
本年度はまずヒト変異SOD1遺伝子導入ラット(以下Tgラット)を繁殖し、未発症期、発症期、末期のTgラットと各週齡一致正常同腹仔(コントロール)を確保した。これらにチミジン類似体であるBrdUを一週間連日投与して新生細胞を標識し、脊髄灌流固定凍結切片を作成した。
未分化神経前駆細胞、未成熟・成熟神経細胞、およびグリア前駆細胞、各種成熟グリア細胞(アストログリア、ミクログリア、オリゴデンドログリア)の選択的マーカーとBrdUとの多重免疫組織化学を行った。これらを共焦点レーザー顕微鏡下に観察・画像取得し、画像解析ソフトウェアで解析した。その結果、Tgラットでは有意に多数の新生細胞がコントロールに比して検出された。それら新生細胞の多くはグリア系細胞、あるいはその前駆細胞であることが明らかとなり、Tgラット脊髄では病態進行に伴ってグリア優位の細胞新生が生じていると考えられた。一方で、BrdUによる標識法によって新生細胞の検出率が異なることが判明した。以上から、ニューロン新生の検索には新生細胞標識法の改善とともに多くの対象試料を検索する必要がある。
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