| 研究概要 |
ステロイドホルモンであるエストロゲンは様々な疾患・癌に深く関わっているが、その分子メカニズムの解明は十分ではない。エストロゲンはリガンド依存性の転写因子であるエストロゲン受容体(ERα,ERβ)を活性化し、ゲノム中のエストロゲン応答配列(ERE)の近傍に存在する標的遺伝子の発現を直接制御することによってその作用を発揮している。本研究では、エストロゲン応答能を有する子宮内膜癌および乳癌由来の細胞株を用いて、細胞内において実際に機能的なEREをクロマチン免疫沈降法(ChIP)を用いて同定することにより、全ゲノムに渡るEREをリストアップし、エストロゲンシグナルの全貌を明らかにすることを目的とする。現在、特にERβに対する特異抗体はChIPに使用できるほどの高品質のものは存在していない。そこで、本年度の研究ではまずこの状況を克服するためにGST融合タンパク質(GST-ERαとGST-ERβ)を作製してウサギに免疫することにより、ERαとERβに対するポリクローナル抗体を作製した。得られた抗体は内在性のERαとERβをそれぞれ効率より認識することをウエスタンブロット法によって確認した。また、これらの抗体を用いてエストロゲン応答性が明らかにされている子宮内膜癌由来のIshikawa細胞および乳癌由来のMCF7細胞でChIPを行い、実際に細胞内で機能的なERE配列を含むゲノムDNA断片を抽出するための条件を検討した。これらの解析を通じて機能的なERE配列をリストアップし、周囲のシスエレメントとも合わせて解析することにより、特に、ERαとERβによる共通性ならびに相違性に着目して解析することにより、ERサブタイプ間での制御機構の相違ならびに細胞・組織特異性について解析できる可能性が示唆された。
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