| 研究概要 |
本年度は、重要な生物学的特性を有するヒトタイプIIコラーゲン分子の範囲を特定し、それらを主な構成成分とするスーパーコラーゲン分子を遺伝子工学的に作成するため以下の実験を行った。
1.Recombinant human collagen II variantsの作成
ヒトタイプIIコラーゲンの螺旋領域を4つの部位(D1,D2,D3,D4)に分けてコードしたDNA cassetteを用い、Recombinat wild type collagenIIと特定な領域を4つ繋げたmulti-D collagen IIのDNA constructを構築した。これらのDNA constructをpcDNA2.1 vectorに組み込み、HT-1080に遺伝子導入し発現させた。
2.Recombinant human collagen II variantsの性状解析
発現させたRecombinat collagensを培養液から回収・精製し、解析した。Western blott.および電子顕微鏡にて、これらのRecombinant proteinsは理想的な分子量を持ち、形態もnative-collagenと同様であった。
3.Recombinant human collagen IIの部位特異性の解析
Agarose drop assayにより、coatした各種のmulti-D collagen上における軟骨細胞の移動距離を比較した結果、D4領域に軟骨細胞を誘導・活性化する特性を認めた。
上記結果より、軟骨細胞を誘導・活性化するコラーゲン分子の部位特異的領域がD4領域であることが示唆され、それを主な構城成分とするスーパーコラーゲン分子の遺伝子工学的作成が可能となった。現在、スーパーコラーゲンをscaffoldにcoatし、その上の軟骨細胞の挙動を観察している。
今後、スーパーコラーゲンを用いてIn Vivoにおける実験を予定している。
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