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本年度は人工口腔システムを構築し、人工的に口臭を産生する環境を再現し、口臭予防剤の評価のためのin vitroシステムの構築を行った。
1)人工口腔システムの構築
透明色の塩化ビニールで作製した人工口腔の内部を37℃に維持し、人工口腔の上部にとりつけたステンレスチューブから実験溶液、細菌懸濁液、培地をローラーポンプによって滴下した。人工口腔下部のホルダーにはType Iコラーゲンをコーティングさせたカバーグラスを固定した。システム全体を嫌気忖チャンバーに入れ、内部を嫌気状態にした上で、コラーゲン上に細菌懸濁液滴下によりbiofilmを作製し、その後実験溶液(口臭予防剤)を滴下し、滴下後、人工口腔内の揮発性硫黄化合物(VSC)を定量した。
2)使用菌株
菌体にはPorphyromonas gingivalis ATCC33277株を用いた。ヘミン、メナジオン含有Brain heartinfusion液体培地で培養後、菌数を分光光度肝で測定し、等張リン酸緩衝液にて濃度を調整、細菌懸濁液とした。
3)評価法
試料採取管から人工口腔内の気体サンプルを採取し、ガスクロマトグラフィーを用いて分析を行った。またクリスタルバイオレットで染色後、プレートリーダーにて吸光度を測定し細菌量を定量した。
4)結果・考察
菌体懸濁液を滴下後、人工口腔内のVSCは急速に検出され、経時的にVSCの値は増大した。この結果、人工口腔内での細菌によるVSCの産生が確認された。人工的に口臭を産生する環境を再現したことにより、この人工口腔システムが口臭予防剤の評価のためのin vitroシステムに有用である可能性が示唆された。
本研究の要旨の一部はThe 3rd Conference of Asian Association for Breath Odor Research(2006年11月29日岡山市)において発表した。
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