C型肝炎ウイルスのゲノム複製から粒子形成への過程移行を制御する分子機構

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18H02661
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 鈴木 哲朗 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00250184)
• 研究分担者: 鈴木 亮介 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (50342902) ; 伊藤 昌彦 浜松医科大学, 医学部, 助教 (50385423)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: C型肝炎ウイルス / ゲノム複製 / 粒子形成

研究実績の概要

１）HCV NS5Aの脱リン酸化機構の解析とゲノム複製-粒子形成過程スイッチングへの関与
ウイルスタンパク質の可逆的リン酸化がウイルス増殖過程のコントロールに関与するかは全くと言ってよいほど明らかにされていない。C型肝炎ウイルス(HCV) NS5Aはゲノム複製と粒子形成両方を制御する重要因子であり、申請者はすでにCK-1alphaによるリン酸化がHCV NS5Aの機能に重要であることを見出している。NS5Aの脱リン酸化に働くセリンスレオニンプロテインホスファターゼを同定するため、試験管内転写・翻訳系で各プロテインホスファターゼを合成しNS5A結合性をin vitro AlphaScreenシステムで解析した。得られた３種類のNS5A結合性酵素についてNS5Aのリン酸化様式への関与、HCV産生への影響を培養細胞系で解析した結果、NS5Aの脱リン酸化酵素として、PPM (metal-dependent protein phosphatase)ファミリーの一種PPM1B variant 1を初めて同定した。PPM1B variant 1の強制発現によりHCV産生が低下することを示した。これによってNS5Aの可逆的リン酸化機構の存在が明らかとなった。動的リン酸化がウイルス増殖過程の進行を制御する仕組みの解析が期待される。

２）HCV因子と相互作用しHCVゲノム複製から粒子形成過程制御に関与する新規宿主因子の探索と機能解析
HCV感染によって発現が誘導されるRNA結合因子群の中から、HCV生活環の制御に関わる新規宿主因子を探索し、HCV感染によって発現亢進し、遺伝子ノックダウンによりHCV産生が劇的に低下する因子としてLaファミリータンパク質の１種LARP6 (La-related protein 6)を見出した。

現在までの達成度 (段落)

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Occludin-binding single-chain variable fragment and antigen-binding fragment antibodies prevent hepatitis C virus infection. (2021)
  • 著者名/発表者名: Shimizu Y, Shinoda T, Shirasago Y, Kondoh M, Shinya N, Hanada K, Yagi K, Suzuki T, Wakita T, Kimura-Someya T, Shirouzu M, Fukasawa M.
  • 雑誌名: FEBS letters 巻: 595 ページ: 220-229
  • DOI: 10.1002/1873-3468.13975
  • 査読あり
• [雑誌論文] BAC-DROP: Rapid Digestion of Proteome Fractionated via Dissolvable Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Its Application to Bottom-Up Proteomics Workflow. (2021)
  • 著者名/発表者名: Takemori A, Ishizaki J, Nakashima K, Shibata T, Kato H, Kodera Y, Suzuki T, Hasegawa H, Takemori N.
  • 雑誌名: Journal of proteome research 巻: 20 ページ: 1535-1543
  • DOI: 10.1021/acs.jproteome.
  • 査読あり
• [雑誌論文] N-Terminal PreS1 Sequence Regulates Efficient Infection of Cell-Culture-Generated Hepatitis B Virus. (2021)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Yamada N, Osaki Y, Shiina M, Aly HH, Iwamoto M, Tsukuda S, Watashi K, Matsuda M, Suzuki R, Tanaka T, Moriishi K, Suzuki T, Nishitsuji H, Sugiyama M, Mizokami M, Shimotohno K, Wakita T, Muramatsu M, Liang TJ, Kato T.
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 73 ページ: 520-532
  • DOI: 10.1002/hep.31308
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Advancement of capture immunoassay for real-time monitoring of hepatitis E virus-infected monkey. (2020)
  • 著者名/発表者名: 14.Khoris IM, Chowdhury AD, Li TC, Suzuki T, Park EY.
  • 雑誌名: Analytica chimica acta. 巻: 1110 ページ: 64-71
  • DOI: 10.1016/j.aca.2020.02.020
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Controlling distance, size and concentration of nanoconjugates for optimized LSPR based biosensors. (2020)
  • 著者名/発表者名: Chowdhury AD, Nasrin F, Gangopadhyay R, Ganganboina AB, Takemura K, Kozaki I, Honda H, Hara T, Abe F, Park S, Suzuki T, Park EY.
  • 雑誌名: Biosens Bioelectron 巻: 170 ページ: 112657
  • DOI: 10.1016/j.bios.2020.112657
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Hollow magnetic-fluorescent nanoparticles for dual-modality virus detection. (2020)
  • 著者名/発表者名: Ganganboina AB, Chowdhury AD, Khoris IM, Doong RA, Li TC, Hara T, Abe F, Suzuki T, Park EY.
  • 雑誌名: Biosens Bioelectron 巻: 170 ページ: 112680
  • DOI: 10.1016/j.bios.2020.112680
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Prevalence and viral loads of polyomaviruses BKPyV, JCPyV, MCPyV, TSPyV and NJPyV and hepatitis viruses HBV, HCV and HEV in HIV-infected patients in China. (2020)
  • 著者名/発表者名: Zhou X, Nakashima K, Ito M, Zhang X, Sakai S, Feng C, Sun H, Chen H, Li T-C, Suzuki T.
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 10 ページ: 17066
  • DOI: 10.1038/s41598-020-74244-0
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Agglutination of human polyomaviruses by using a tetravalent glycocluster as a cross-linker. (2020)
  • 著者名/発表者名: Ogata M, Onoda T, Koizumi A, Tokunaga Y, Ohta I, Nukuzuma S, Park EY, Usui T, Suzuki T.
  • 雑誌名: ACS Omega 巻: 5 ページ: 21940-21947
  • DOI: 10.1021/acsomega.0c03269
  • 査読あり