| 研究実績の概要 |
約100種類の肉腫関連融合遺伝子のクローニングを行い, マウス線維芽細胞である3T3細胞に導入し, focus formation assay及びmixed all nominated mutants in one method (MANO法)でのcell growth competition assayを行い, がん化能を評価した.
また, C2C12マウス筋芽細胞及びマウス間葉系幹細胞に遺伝子導入し, 分化誘導培地やバイオマテリアルを選択し分化誘導を行い, MANO法での細胞数変化を定量し, 融合遺伝子の分化抑制機能を評価すると共に, 評価に適した培養系を確立した.
さらに, トランスフォームしたがん細胞のみが生存可能なバイオマテリアル探索を行った. がん化を確認できた融合遺伝子を3T3細胞, C2C12細胞に導入したisogenicモデルで, 異なる蛍光蛋白質でラベルした親株とがん化株をポリマースライド上に播種し, 比較セルアレイを実施した. がん化株のみが有意に増殖・接着する合成ポリマーを蛍光イメージングにより抽出した.
3T3細胞, C2C12細胞, マウス間葉系幹細胞に肉腫関連融合遺伝子を導入したisogenic細胞株のRNA-seqを行い, 各融合遺伝子が発現制御する特異的な遺伝子発現パターンを比較し, 融合遺伝子のクラスタリング解析を行った. さらに, Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)により各融合遺伝子の特徴となる発現遺伝子群やシグナルパスウェイを同定しクラスターごとに, 候補分子標的薬の選定を行った. MANO法を用いて候補薬剤評価実験を行い, 融合遺伝子特異的に作用する分子標的薬を同定した.
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