| 研究課題/領域番号 |
18H02686
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| 研究機関 | 愛知県がんセンター(研究所) |
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研究代表者 |
青木 正博 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 分野長 (60362464)
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| 研究分担者 |
三城 恵美 (佐藤恵美) 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, リサーチレジデント (00455544)
梶野 リエ 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 研究員 (20633184)
小島 康 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 主任研究員 (30464217)
藤下 晃章 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 主任研究員 (50511870)
佐久間 圭一朗 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, ユニット長 (90402891)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 大腸がん / 転移 / マウスモデル / マルチオミクス解析 / プロテオーム解析 |
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| 研究実績の概要 |
①HNRNPLLの下流標的分子および発現制御機構の解明
前年度に引き続き、HNRNPLLによる選択的スプライシングによって発現制御されるCTNND1 isoform 3Aとisoform 3ABの機能を検討した。第一のアプローチとして、CRISPR-Cas9を用いて、それぞれのアイソフォームを特異的にノックアウトした大腸がん細胞株の樹立に成功した。現在、それらの細胞のフェノタイプを様々なアッセイにより検討中である。第二のアプローチとして、免疫沈降-質量分析(IP-MS)により両アイソフォームに特異的に結合する候補タンパクを同定し、現在個々に検証を進めている。一方、HNRNPLLの転写調節機構については、プロモーター領域の解析をほぼ完了し、エンハンサー領域の解析に取り組んでいる。また、大腸がん細胞株の上皮間葉転換に際して発現が低下する転写因子の中から、ノックアウトによりHNRNPLLの発現が低下するものを複数同定し、クロマチン免疫沈降法やルシフェラーゼアッセイによる詳細な検討を進めている。
②新規大腸がん自然転移モデルを用いたマルチオミクス解析による転移機構の解明
我々が作出した大腸がん自然転移モデルマウス（villin-CreERT2;Ctnnb+/loxEX3;Kras+/LSLG12D;Trp53 lox/lox;Smad4lox/lox複合変異マウス： VCKPSマウス）の大腸がん原発巣および肝転移巣を用いて、トランスクリプトーム解析(RNAseq)を実施した。エンリッチメント解析により大腸がん原発巣と肝転移巣を比較したところ、両群で変動する遺伝子群に大きな差は認められなかった。肝転移巣で発現が増加していた個々の遺伝子についてプロテオーム解析結果と比較し、転移関連遺伝子候補を絞り込み、複合変異マウス由来大腸がん細胞株を用いて機能に基づいた検証を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
HNRNPLLにより選択的スプライシングの調節を受けるCNND1 (p120 cateninをコード）について、アイソフォーム3ABと3Aとをそれぞれ特異的にノックアウトした大腸がん細胞株の樹立に成功した。また、VCKPSマウスに発症する大腸がん原発巣、転移巣のマルチオミクス解析から、転移関連遺伝子候補を絞り込むことができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
CTNND1のスプライシングアイソフォーム3ABと3Aとをそれぞれ特異的にノックアウトした大腸がん細胞株を用いて、上皮間葉転換誘導の際に発現が上昇するアイソフォーム3Aの機能を解析する。特に、遊走や浸潤、増殖における役割に着目する。また、HNRNPLLの転写調節機構についても、エンハンサー領域の解析を進め、調節への関与が示唆されている転写因子の役割を明らかにする。大腸がん自然転移モデルであるVCKPSマウスを用いた解析については、マルチオミクス解析によって絞り込んだ転移関連遺伝子候補について、同マウス由来の細胞株やオルガノイド で候補遺伝子の発現を変動させて移植する系を用いて、幹細胞性や転移能における役割を評価する。
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