| 研究課題/領域番号 |
18H02784
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| 研究機関 | 藤田医科大学 |
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研究代表者 |
吉川 哲史 藤田医科大学, 医学部, 教授 (80288472)
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| 研究分担者 |
井平 勝 藤田医科大学, 保健学研究科, 教授 (10290165)
三浦 浩樹 藤田医科大学, 医学部, 助教 (10751761)
東本 祐紀 藤田医科大学, 医療科学部, 助教 (20569701)
谷口 孝喜 藤田医科大学, 医学部, 名誉教授 (40094213)
河本 聡志 藤田医科大学, 医学部, 准教授 (60367711)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | ロタウイルス / 性器ヘルペスワクチン / リバースジェネティックス / リコンビナントワクチン |
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| 研究実績の概要 |
【具体的内容】過去のHSV-2ワクチンで候補遺伝子として使用されているgD2を最初に選択した。約900bpのgD塩基配列をベクターへ組み込むために、制限酵素サイトで挟んだgD2発現用塩基配列を人工合成しSA11のNSP-1プラスミドにサブクローニングした。gD組み込みNSP-1プラスミドを含んだ全11種類のSA11遺伝子分節を組み込んだプラスミドを用い、ロタウイルスリバースジェネティクスシステムによりHSV-2 gD組み込みSA11(rSA11-gD2)を作製した。rSA11-gD2のHSV-2 gD蛋白発現をin vitroで確認するため、CV1細胞にrSA11-gD2を感染させ、感染細胞の培養上清を用いてWestern blottingにてHSV-2 gD蛋白の発現を確認した。 次に、In vivoでの免疫原性を確認するため、雌BALB/cマウスに5日齢、19日齢の計2回rSA11-gD2を経口接種した。1回目接種後の下痢スコアは野生株SA11感染マウスと同一で、Mock感染より有意に高値だった。2回目接種後4週間の47日齢に血清を採取し中和抗体法を行ったが、4倍希釈血清中の中和抗体は陰性だった。その後、8週令マウスに同様の接種実験を行った結果、ELISA法でRV IgG、IgA抗体の上昇と、HSV-2gD IgG抗体価の有意上昇を確認した。
【意義と重要性】マウスロタウイルスリバースジェネティックス系を用いて、HSV gD2タンパクを発現するロタウイルスの構築に成功した。これまでの研究成果と同様、NSP1領域にHSV由来外来遺伝子を挿入してもウイルスの増殖能に影響はなく、今後の組み換えワクチン作成のための重要な知見と考える。
【今後の研究の展開】免疫応答が確認された成熟マウスを用いて、接種ウイルス量を増量する等により、より高い免疫誘導を試みる予定。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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