NAFLD/NASH肝組織リン酸化活性プロファイリングと新規治療標的分子の同定

2019 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18H02793
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 本多 政夫 金沢大学, 保健学系, 教授 (00272980)
• 研究分担者: 堀本 勝久 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 招聘研究員 (40238803) ; 鍵和田 晴美 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 主任研究員 (40443204)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 非アルコール性脂肪性肝炎 / リン酸化 / プロテインアレイ

研究実績の概要

申請者らは世界最大のヒトタンパク質発現リソースHuPEX (Human Proteome Expression Resource)（約2万種）を基に高操作性・ハイスループットなプロテインアレイを作製し、正味のチロシンキナーゼ活性を高感度に測定する系を初めて確立した。本研究目的は新技術プロテインアレイを用いて、NAFLD/NASH肝組織のリン酸化プロファイルを明らかにして新規治療標的を同定する。
本年度はAth+HFDマウス肝組織の12週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）、30週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）、60週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）のリン酸化アレイを行った。1377個のリン酸化タンパクを標的とし、1サンプルあたり、6回の測定を行い、計180アレイの解析を行った。コントロールと比較し、12週では137個(p<0.005)、30週では154個(p<0.005)、60週では36個(p<0.005)の遺伝子のリン酸化変動が認められた。60週ではむしろ変動遺伝子の低下が認められ、炎症シグナルの減弱によるものと推察された。12週から60週までの全てを対象とした場合、変動遺伝子は203個（上昇：148個、低下：55個）(p<0.005)であった。発現上昇する遺伝子のパスウェイ解析では1）WNTシグナル、2）ケモカインシグナル、3）TGF-βシグナル、4）神経ペプチドシグナルの活性化が認められた。一方、発現低下する遺伝子のパスウェイ解析では1）血管新生制御、2）細胞接着、3）好中球活性化制御が認められた。特に変動の大きな13遺伝子の中には、液性因子レセプターが含まれ、創薬の候補になり得ると考えられた。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

Ath+HFDマウス肝組織のリン酸化アレイを実施し、標的リン酸化蛋白の候補を同定した。また、ヒトNASH肝組織におけるリン酸化プロファイルを施行中である。

今後の研究の推進方策

申請者らは世界最大のヒトタンパク質発現リソースHuPEX (Human Proteome Expression Resource)（約2万種）を基に高操作性・ハイスループットなプロテインアレイを作製し、正味のチロシンキナーゼ活性を高感度に測定する系を初めて確立した。本研究目的は新技術プロテインアレイを用いて、NAFLD/NASH肝組織のリン酸化プロファイルを明らかにして新規治療標的を同定する。
本年度はAth+HFDマウス肝組織の12週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）、30週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）、60週（Ath+HFD：5サンプル、コントロール：5サンプル）のリン酸化アレイを行った。1377個のリン酸化タンパクを標的とし、1サンプルあたり、6回の測定を行い、計180アレイの解析を行った。現在、ヒトNASH肝組織手術サンプル（20症例：癌部・非癌部）の解析を実施中であり、マウスの結果との比較を行う。マウスモデル解析では液性因子レセプターが同定されたことから、液性因子レセプター抗体を用いた in vitro及びin vivoでの検証を行う。

研究成果

• [雑誌論文] A novel α-fetoprotein-derived helper T-lymphocyte epitope with strong immunogenicity in patients with hepatocellular carcinoma (2020)
  • 著者名/発表者名: Tamai Toshikatsu、Mizukoshi Eishiro、Kumagai Masashi、Terashima Takeshi、Iida Noriho、Kitahara Masaaki、Shimakami Tetsuro、Kitamura Kazuya、Arai Kuniaki、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Yamashita Tatsuya、Honda Masao、Fushimi Kazumi、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 10 ページ: 4021
  • DOI: 10.1038/s41598-020-60843-4
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 2.Fatty acid-driven modifications in T-cell profiles in non-alcoholic fatty liver disease patients. (2020)
  • 著者名/発表者名: Seike T, Mizukoshi E, Yamada K, Okada H, Kitahara M, Yamashita T, Arai K, Terashima T, Iida N, Fushimi K, Yamashita T, Sakai Y, Honda M, Harada K, Kaneko S.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: - ページ: in press
  • DOI: 10.1007/s00535-020-01679-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Xanthine oxidase inhibition attenuates insulin resistance and diet-induced steatohepatitis in mice (2020)
  • 著者名/発表者名: Nishikawa Tomoki、Nagata Naoto、Shimakami Tetsuro、Shirakura Takashi、Matsui Chieko、Ni Yinhua、Zhuge Fen、Xu Liang、Chen Guanliang、Nagashimada Mayumi、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Yamashita Tatsuya、Mizukoshi Eishiro、Honda Masao、Kaneko Shuichi、Ota Tsuguhito
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 10 ページ: 815
  • DOI: 10.1038/s41598-020-57784-3
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Gut-derived Enterococcus faecium from ulcerative colitis patients promotes colitis in a genetically susceptible mouse host (2019)
  • 著者名/発表者名: Seishima Jun、Iida Noriho、Kitamura Kazuya、Yutani Masahiro、Wang Ziyu、Seki Akihiro、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Honda Masao、Yamashita Tatsuya、Kagaya Takashi、Shirota Yukihiro、Fujinaga Yukako、Mizukoshi Eishiro、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Genome Biology 巻: 20 ページ: 252
  • DOI: 10.1186/s13059-019-1879-9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Danaparoid sodium-based anticoagulation therapy for portal vein thrombosis in cirrhosis patients (2019)
  • 著者名/発表者名: Hayashi T、Takatori H、Horii R、Nio K、Terashima T、Iida N、Kitahara M、Shimakami T、Arai K、Kitamura K、Kawaguchi K、Yamashita T、Sakai Y、Yamashita T、Mizukoshi E、Honda M、Toyama T、Okumura K、Kozaka K、Kaneko S
  • 雑誌名: BMC Gastroenterology 巻: 19 ページ: 217
  • DOI: 10.1186/s12876-019-1140-8
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] MicroRNA‐10a Impairs Liver Metabolism in Hepatitis C Virus‐Related Cirrhosis Through Deregulation of the Circadian Clock Gene Brain and Muscle Aryl Hydrocarbon Receptor Nuclear Translocator‐Like 1 (2019)
  • 著者名/発表者名: Horii Rika、Honda Masao、Shirasaki Takayoshi、Shimakami Tetsuro、Shimizu Ryogo、Yamanaka Souma、Murai Kazuhisa、Kawaguchi Kazunori、Arai Kuniaki、Yamashita Tatsuya、Sakai Yoshio、Yamashita Taro、Okada Hikari、Nakamura Mikiko、Mizukoshi Eishiro、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Hepatology Communications 巻: 3 ページ: 1687-1703
  • DOI: 10.1002/hep4.1431
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Characteristics of Impaired Dendritic Cell Function in Patients With Hepatitis B Virus Infection (2019)
  • 著者名/発表者名: Yonejima Atsushi、Mizukoshi Eishiro、Tamai Toshikatsu、Nakagawa Hidetoshi、Kitahara Masaaki、Yamashita Tatsuya、Arai Kuniaki、Terashima Takeshi、Iida Noriho、Fushimi Kazumi、Okada Hikari、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 70 ページ: 25-39
  • DOI: 10.1002/hep.30637
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Establishment and Characterization of a New Cell Line Permissive for Hepatitis C Virus Infection (2019)
  • 著者名/発表者名: Omura Hitoshi、Liu Fanwei、Shimakami Tetsuro、Murai Kazuhisa、Shirasaki Takayoshi、Kitabayashi Juria、Funaki Masaya、Nishikawa Tomoki、Nakai Ryotaro、Sumiyadorj Ariunaa、Hayashi Takehiro、Yamashita Taro、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 9 ページ: 7943
  • DOI: 10.1038/s41598-019-44257-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Biological characteristics of gene expression features in pancreatic cancer cells induced by proton and X-ray irradiation (2019)
  • 著者名/発表者名: Fujinaga Haruo、Sakai Yoshio、Yamashita Tatsuya、Arai Kuniaki、Terashima Takeshi、Komura Takuya、Seki Akihiro、Kawaguchi Kazunori、Nasti Alessandro、Yoshida Keiko、Wada Takashi、Yamamoto Kazutaka、Kume Kyo、Hasegawa Takashi、Takata Takushi、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: International Journal of Radiation Biology 巻: 95 ページ: 571-579
  • DOI: 10.1080/09553002.2019.1558297
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Induction of Selenoprotein P mRNA during Hepatitis C Virus Infection Inhibits RIG-I-Mediated Antiviral Immunity (2019)
  • 著者名/発表者名: Murai Kazuhisa、Honda Masao、Shirasaki Takayoshi、Shimakami Tetsuro、Omura Hitoshi、Misu Hirofumi、Kita Yuki、Takeshita Yumie、Ishii Kiyo-aki、Takamura Toshinari、Urabe Takeshi、Shimizu Ryogo、Okada Hikari、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Cell Host & Microbe 巻: 25 ページ: 588-601
  • DOI: 10.1016/j.chom.2019.02.015
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Serum C16:1n7/C16:0 ratio as a diagnostic marker for non‐alcoholic steatohepatitis (2019)
  • 著者名/発表者名: Yamada Kazutoshi、Mizukoshi Eishiro、Seike Takuya、Horii Rika、Terashima Takeshi、Iida Noriho、Kitahara Masaaki、Sunagozaka Hajime、Arai Kuniaki、Yamashita Tatsuya、Honda Masao、Takamura Toshinari、Harada Kenichi、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 巻: 34 ページ: 1829-1835
  • DOI: 10.1111/jgh.14654
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Adipose tissue‐derived stem cells prevent fibrosis in murine steatohepatitis by suppressing IL‐17‐mediated inflammation (2019)
  • 著者名/発表者名: Yamato Masatoshi、Sakai Yoshio、Mochida Hatsune、Kawaguchi Kazunori、Takamura Masayuki、Usui Soichiro、Seki Akihiro、Mizukoshi Eishiro、Yamashita Taro、Yamashita Tatsuya、Ishida Kousuke、Nasti Alessandro、Tuyen Ho Thuy Bich、Komura Takuya、Yoshida Keiko、Wada Takashi、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 巻: - ページ: in press
  • DOI: 10.1111/jgh.14647
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Distinct chemotherapy-associated anti-cancer immunity by myeloid cells inhibition in murine pancreatic cancer models (2019)
  • 著者名/発表者名: Sakai Yoshio、Miyazawa Masaki、Komura Takuya、Yamada Takeshi、Nasti Alessandro、Yoshida Keiko、Takabatake Hisashi、Yamato Masatoshi、Yamashita Taro、Yamashita Tatsuya、Mizukoshi Eishiro、Okuzono Mai、Ho Tuyen Thuy Bich、Kawaguchi Kazunori、Wada Takashi、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 110 ページ: 903-912
  • DOI: 10.1111/cas.13944
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Surrogacy of Time to Progression for Overall Survival in Advanced Hepatocellular Carcinoma Treated with Systemic Therapy: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials (2019)
  • 著者名/発表者名: Terashima Takeshi、Yamashita Tatsuya、Toyama Tadashi、Arai Kuniaki、Kawaguchi Kazunori、Kitamura Kazuya、Yamashita Taro、Sakai Yoshio、Mizukoshi Eishiro、Honda Masao、Kaneko Shuichi
  • 雑誌名: Liver Cancer 巻: 8 ページ: 130-139
  • DOI: 10.1159/000489505
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development of novel diagnostic system for pancreatic cancer, including early stages, measuring mRNA of whole blood cells (2019)
  • 著者名/発表者名: Sakai Y、Honda M、Matsui S、ほか25名、Kaneko S、Hokuriku Liver Study Group
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 110 ページ: 1364-1388
  • DOI: 10.1111/cas.13971
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] NASHにおける新規バイオマーカーとしての血清ＡＫＲ1Ｂ10の有用性 (2019)
  • 著者名/発表者名: 神野正隆，本多政夫，金子周一
  • 学会等名: 第105回日本消化器病学会総会
• [学会発表] 肝線維化に伴うリモデリングを正常化する新規治療法の開発 (2019)
  • 著者名/発表者名: 岡田光、本多政夫、金子周一
  • 学会等名: 第55回日本肝臓学会総会
• [学会発表] ヒト非B非C肝癌におけるシングルセル遺伝子発現解析 (2019)
  • 著者名/発表者名: 岩淵 禎弘、川口 和紀、本多 政夫、山下 太郎、山下 竜也、金子 周一、橋本 真一
  • 学会等名: 第78回日本癌学会学術学会総会
• [学会発表] Heterogeneity of tumor micro-environment in 2 different HBV associated HCCs (2019)
  • 著者名/発表者名: Sadahiro Iwabuchi, Kazunori Kawaguchi, Masao Honda, Tarp Yamashita, Tatsuya Yamashita, Shuichi Kaneko
  • 学会等名: International HBV meeting 2019
  • 国際学会
• [学会発表] Serum aldo-keto reductase family 1 member B10 predicts HBV-related hepatocellular carcinoma during nucleos(t)ide analogue treatment (2019)
  • 著者名/発表者名: Kazunori Kawaguchi, Masao Honda, Noriaki Orita, Masataka Kanno, Rika Horii, Kouki Nio, Takeshi Terashima, Tetsuro Shimakami, Kuniaki Arai, Taro Yamashita, Yoshio Sakai, Tatsuya Yamashita, Eishiro Mizukoshi, Shuichi Kaneko
  • 学会等名: AASLD2019
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of a host factor for the improvement of immune checkpoint blockade therapy for hepatocellular carcinoma (2019)
  • 著者名/発表者名: Kazuhisa Murai, Masao Honda, Takayoshi Shirasaki, Seishi Murakami, and Shuichi Kaneko
  • 学会等名: AASLD2019
  • 国際学会
• [学会発表] Genome-wide methylation analysis identified a new intrahepatic vascular endothelial marker associated with induction of tumorigenesis after successful eradication of HCV (2019)
  • 著者名/発表者名: Masashi Nishikawa, Masao Honda, Shuichi Kaneko
  • 学会等名: AASLD2019
  • 国際学会