免疫チェックポイント分子阻害を利用した細胞内寄生菌感染に対する新規ワクチンの開発

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18H02818
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 須田 隆文 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397)
• 研究分担者: 榎本 紀之 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50436961) ; 中村 祐太郎 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (60436962) ; 永田 年 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024) ; 藤澤 朋幸 浜松医科大学, 医学部, 助教 (20402357)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 樹状細胞 / 免疫チェックポイント分子 / PD-1/PD-L1 / ワクチン / 細胞内寄生菌感染症

研究実績の概要

本年は、基礎的な研究として、卵白アルブミン（OVA）由来の細胞障害性T細胞（CTL）エピトープ（SYNFEKL）特異的なT細胞受容体（TCR）をもつOT-Iトランスジェニックマウスを用いて、in vitroにおいて、PD-1/PD-L1経路の阻害が樹状細胞（DC）の抗原提示能を高めるか否かを検討した。
1．まず、前段階として、LPSで刺激し、成熟させたマウス骨髄由来DCはPD-L1を強発現することを確認し、また、OTマウス由来のCD8陽性T細胞にも活性化される過程でPD-Iの発現が強く誘導されることを確認した。
2．次に、OT-Iマウス由来の脾臓CD8陽性T細胞と、マウス骨髄由来DC、CTLエピトープ・ペプチドを共培養し、IFNγ産生、CD8陽性T細胞の増殖に、抗PD-1抗体、あるいは抗PD-L1抗体添加が与える影響を検討した。しかし、予想に反して、少なくともin vitroでは、これらの抗体によるPD-1/PD-L1経路の阻害は、IFNγ産生やCD8陽性T細胞の増殖を高めることはなかった。
3．様々な条件を変えて、同様の実験を行ったが同じ結果であったため、次に、代表的な細胞内寄生菌感染症のモデルとなるリステリア菌のCTLエピトープ・ペプチド（LLO91-99)をDCにパルスし、naiveマウスに接種し、その後、抗PD-1抗体、あるいは抗PD-L1抗体を腹腔内投与するというvivoの実験に移った。その結果、抗PD-1抗体、あるいは抗PD-L1抗体投与によって、LLO91-99特異的なT細胞受容体をもつCTLの増加、また、脾細胞においてLLO91-99特異的IFNγの産生が高まることを確認した。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

最初のin vitroでは想定したような結果がでなかったため、研究全体の進捗は若干遅れたが、直近のScienceに報告されたように、「DCは、PD-L1を強発現していても、CD80やCD86などの共役分子の発現によって、PD-1/PD-L1の結合が阻害される」と言うことを、ある意味証明することとなった（今回用いた成熟DCは、PD-L1と共に、CD80とCD86を強発現していた）。但し、次に行ったin vivoのリステリア菌を用いた実験では、preliminaryではあるがpromisingな結果が得られており、生体においては、その他のPD-L1を発現している細胞が、リステリア菌に対するCTL誘導に関わっている可能性を示唆する興味深い結果であった。

今後の研究の推進方策

リステリア菌による細胞内寄生菌感染症モデルを用いて、リステリア菌パルスDCワクチン接種後、抗PD-1抗体、あるいは抗PD-L1抗体を腹腔内投与することによって、まず、リステリア菌特異的CTLの誘導能とその機能が増強されることを確認し、最終的には、リステリア菌を接種する感染モデルにおいて、その感染防御誘導能を検討する。

研究成果

• [雑誌論文] Nationwide cloud-based integrated database of idiopathic interstitial pneumonias for multidisciplinary discussion (2019)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa Tomoyuki、Suda Takafumi
  • 雑誌名: European Respiratory Journal 巻: 53 ページ: 1802243～1802243
  • DOI: 10.1183/13993003.02243-2018
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Distinct profile and prognostic impact of body composition changes in idiopathic pulmonary fibrosis and idiopathic pleuroparenchymal fibroelastosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Yuzo、Yoshimura Katsuhiro、Enomoto Yasunori、Yasui Hideki、Hozumi Hironao、Karayama Masato、Furuhashi Kazuki、Enomoto Noriyuki、Fujisawa Tomoyuki、Nakamura Yutaro、Inui Naoki、Suda Takafumi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 8 ページ: 14074
  • DOI: 10.1038/s41598-018-32478-z
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] LTBP2 is secreted from lung myofibroblasts and is a potential biomarker for idiopathic pulmonary fibrosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Enomoto Yasunori、Matsushima Sayomi、Shibata Kiyoshi、Aoshima Yoichiro、Yagi Haruna、Meguro Shiori、Kawasaki Hideya、Kosugi Isao、Fujisawa Tomoyuki、Enomoto Noriyuki、Inui Naoki、Nakamura Yutaro、Suda Takafumi、Iwashita Toshihide
  • 雑誌名: Clinical Science 巻: 132 ページ: 1565～1580
  • DOI: 10.1042/CS20180435
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Macrophage mannose receptor, CD206, predict prognosis in patients with pulmonary tuberculosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Yuzo、Shirai Masahiro、Asada Kazuhiro、Yasui Hideki、Karayama Masato、Hozumi Hironao、Furuhashi Kazuki、Enomoto Noriyuki、Fujisawa Tomoyuki、Nakamura Yutaro、Inui Naoki、Shirai Toshihiro、Hayakawa Hiroshi、Suda Takafumi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 8 ページ: 13129
  • DOI: 10.1038/s41598-018-31565-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] IL-17A Attenuates IFN-λ Expression by Inducing Suppressor of Cytokine Signaling Expression in Airway Epithelium (2018)
  • 著者名/発表者名: Niwa Mitsuru、Fujisawa Tomoyuki、Mori Kazutaka、Yamanaka Katsumasa、Yasui Hideki、Suzuki Yuzo、Karayama Masato、Hozumi Hironao、Furuhashi Kazuki、Enomoto Noriyuki、Nakamura Yutaro、Inui Naoki、Suzuki Tetsuro、Maekawa Masato、Suda Takafumi
  • 雑誌名: The Journal of Immunology 巻: 201 ページ: 2392～2402
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1800147
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Mutlidisciplinary Analysis of Thoracic Lesions in patients with Systemic Lupus Erythematosus: A Retrospective Multicenter Study (2018)
  • 著者名/発表者名: Enomoto N, Egashira R, Tabata K, Hashisako M, Waseda Y, Ishizuka T, Watanabe S, Kasahara K, Izumi S, Shiraki A, Miyamoto A, Kishi K, Kishaba T, Sugimoto C, Inoue Y, Kataoka K, Kondoh Y, Tsuchiya Y, Baba T, Kitani M, Sugiura H, Tanaka T, Sumikawa H, Suda T
  • 学会等名: American Thoracic Society
  • 国際学会
• [学会発表] Clinical Features and Prognostic Factors for Dermatomyositis-Associated Intertitial Lung Diseases with Anti-MDA5 Anibody (2018)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa T, Hozumi H, Yasui H, Suzuki Y, Karayama M, Furuhashi K, Enomoto N, Nakamura Y, Inui N, Suda T
  • 学会等名: American Thoracic Society
  • 国際学会
• [学会発表] Comparison of Clinical Features between Th2-high and Th2-low Asthma (2018)
  • 著者名/発表者名: Fukada A, Toyoshima M, Akahori D, Suda T
  • 学会等名: American Thoracic Society
  • 国際学会
• [学会発表] Prognostic Factors in Patients with Chronic Pulmonary Aspergillosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Furuhashi K, Sakurai S, Kamiya Y, Yasui H, Karayama M, Suzuki Y, Hozumi H, Enomoto N, Fujisawa T, Nakamura Y, Inui N, Suda T
  • 学会等名: American Thoracic Society
  • 国際学会
• [学会発表] Myeloperoxidase-Antineutrophil Cytoplasmic Antibody in Patients with Idiopathic Interstitial Pneumonias (2018)
  • 著者名/発表者名: Hozumi H, Yasui H, Suzuki Y, Kono M, Karayama M, Furuhashi K, Enomoto N, Fujisawa T, Nakamura Y, Inui N, Suda T
  • 学会等名: American Thoracic Society
  • 国際学会