節足動物媒介ウイルスの特異な感染現象を反映したゲノム改変型宿主細胞の開発

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18H02856
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 伊澤 晴彦 国立感染症研究所, 昆虫医科学部, 室長 (90370965)
• 研究分担者: 深澤 征義 国立感染症研究所, 細胞化学部, 部長 (20291130) ; 駒形 修 国立感染症研究所, 昆虫医科学部, 主任研究官 (20435712) ; 沢辺 京子 国立感染症研究所, 昆虫医科学部, 主任研究官 (10215923)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 節足動物媒介性ウイルス / 宿主細胞 / ゲノム科学 / ゲノム編集 / バイオインフォマティクス

研究実績の概要

前年度までに作出に成功したネッタイシマカ由来新規培養細胞系AeAe-GH98について、各種蚊媒介性フラビウイルス（デングウイルス、黄熱ウイルス、ジカウイルス）に対し異なる感受性を示す遺伝的な背景を調べる目的で、これらフラビウイルス感染に際して応答する遺伝子をトランスクリプトーム解析で調査し、特徴的な発現動態を示す候補遺伝子を複数見出した。蚊媒介性アルファウイルスの一種であるゲタウイルスについて、各種蚊由来培養細胞系を用いてその感受性を検討した結果、培養細胞の由来する蚊の属によって異なる感受性と細胞障害性を示す結果が得られ、宿主特異性との関連が示唆された。既存のマダニ由来培養細胞には複数のウイルスが潜在的に感染していることが判明したため、薬剤による除去を試みている。
前年度までにコガタアカイエカ由来NIID-CTR細胞のゲノム配列を取得しているが、正確な遺伝子予測を行うために、島根県由来のコガタアカイエカ飼育系統の昆虫個体を用いてRNA-seq解析を行った。また、同島根県由来のコガタアカイエカのオス個体について全ゲノムシーケンシングおよびde novo assemblyを行った。この配列をもとに培養細胞と個体との間で比較ゲノム解析を行い、細胞不死化ともなうゲノム上の変化を明らかにできると期待される。
Vero細胞において、日本脳炎ウイルス（JEV）rAT株の持続感染細胞株を樹立した。また、シンドビスウイルス（SINV）とJEVの共持続感染細胞も樹立できた。これら細胞株は1年間以上にわたり、持続感染を維持できることも確認した。SINV単独の持続感染細胞は樹立できなかった。非感染・JEV一過性感染・持続感染細胞（2種）間での遺伝子発現パターンを比較し，各感染形態に特徴的な遺伝子発現変化の情報を得て、変化の見られた遺伝子についてウイルス増殖・持続性獲得に対する影響を解析している。

現在までの達成度 (段落)

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Detection of Quaranjavirus-Like Sequences from <i>Haemaphysalis hystricis</i> Ticks Collected in Japan (2022)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Daisuke、Kuwata Ryusei、Kimura Toshiya、Faizah Astri Nur、Higa Yukiko、Hayashi Toshihiko、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Japanese Journal of Infectious Diseases 巻: 75 ページ: 195～198
  • DOI: 10.7883/yoken.JJID.2021.129
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] L-DOPA, a treatment for Parkinson's disease, and its enantiomer D-DOPA inhibit severe fever with thrombocytopenia syndrome virus infection in vitro (2022)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Motohiko、Murae Mana、Gemba Ryutaro、Irie Takuya、Shimojima Masayuki、Saijo Masayuki、Noguchi Kohji、Fukasawa Masayoshi
  • 雑誌名: Journal of Infection and Chemotherapy 巻: 28 ページ: 373～376
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2021.11.005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determining vector competence of Aedes aegypti from Ghana in transmitting dengue virus serotypes 1 and 2 (2021)
  • 著者名/発表者名: Amoa-Bosompem Michael、Kobayashi Daisuke、Itokawa Kentaro、Murota Katsunori、Faizah Astri Nur、Azerigyik Faustus Akankperiwen、Hayashi Takaya、Ohashi Mitsuko、Bonney Joseph H. Kofi、Dadzie Samuel、Tran Cuong Chi、Tran Phong Vu、Fujita Ryosuke、Maekawa Yoshihide、Kasai Shinji、Yamaoka Shoji、Ohta Nobuo et al.
  • 雑誌名: Parasites & Vectors 巻: 14 ページ: 228
  • DOI: 10.1186/s13071-021-04728-z
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Toyo virus, a novel member of the Kaisodi group in the genus Uukuvirus (family Phenuiviridae) found in Haemaphysalis formosensis ticks in Japan (2021)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Daisuke、Kuwata Ryusei、Kimura Toshiya、Faizah Astri Nur、Higa Yukiko、Hayashi Toshihiko、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Archives of Virology 巻: 166 ページ: 2751～2762
  • DOI: 10.1007/s00705-021-05193-w
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of Jingmenviruses in Japan with Evidence of Vertical Transmission in Ticks (2021)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Daisuke、Kuwata Ryusei、Kimura Toshiya、Shimoda Hiroshi、Fujita Ryosuke、Faizah Astri Nur、Kai Izumi、Matsumura Ryo、Kuroda Yudai、Watanabe Shumpei、Kuniyoshi Sawako、Yamauchi Takeo、Watanabe Mamoru、Higa Yukiko、Hayashi Toshihiko、Shinomiya Hiroto、Maeda Ken、Kasai Shinji、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Viruses 巻: 13 ページ: 2547～2547
  • DOI: 10.3390/v13122547
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Screening for tick-borne and tick-associated viruses in ticks collected in Ghana (2021)
  • 著者名/発表者名: Amoa-Bosompem Michael、Kobayashi Daisuke、Faizah Astri Nur、Kimura Shohei、Antwi Ama、Agbosu Esinam、Pratt Deborah、Ohashi Mitsuko、Bonney Joseph H. Kofi、Dadzie Samuel、Ejiri Hiroko、Ohta Nobuo、Sawabe Kyoko、Iwanaga Shiroh、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Archives of Virology 巻: 167 ページ: 123～130
  • DOI: 10.1007/s00705-021-05296-4
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Antiviral Effects of the Anti-Occludin Monoclonal Antibody on Persistent Hepatitis C Virus Infection in a Human Liver Chimeric Mouse Model (2021)
  • 著者名/発表者名: Shimizu Yoshimi、Suzuki Takeru、Shirasago Yoshitaka、Kondoh Masuo、Suzuki Tetsuro、Wakita Takaji、Fukasawa Masayoshi
  • 雑誌名: BPB Reports 巻: 4 ページ: 142～147
  • DOI: 10.1248/bpbreports.4.5_142
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Structural basis of antiviral activity of caffeic acid against severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (2021)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Motohiko、Shirasago Yoshitaka、Tanida Isei、Kakuta Soichiro、Uchiyama Yasuo、Shimojima Masayuki、Hanada Kentaro、Saijo Masayuki、Fukasawa Masayoshi
  • 雑誌名: Journal of Infection and Chemotherapy 巻: 27 ページ: 397～400
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2020.10.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Several catechins and flavonols from green tea inhibit severe fever with thrombocytopenia syndrome virus infection in vitro (2021)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Motohiko、Shimojima Masayuki、Saijo Masayuki、Fukasawa Masayoshi
  • 雑誌名: Journal of Infection and Chemotherapy 巻: 27 ページ: 32～39
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2020.08.005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Discovery of a Novel Flavivirus (Flaviviridae) From the Horse Fly, <i>Tabanus rufidens</i> (Diptera: Tabanidae): The Possible Coevolutionary Relationships Between the Classical Insect-Specific Flaviviruses and Host Dipteran Insects (2020)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Daisuke、Watanabe Mamoru、Faizah Astri Nur、Amoa-Bosompem Michael、Higa Yukiko、Tsuda Yoshio、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Journal of Medical Entomology 巻: 58 ページ: 880～890
  • DOI: 10.1093/jme/tjaa193
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Entomological Assessment of the Status and Risk of Mosquito-borne Arboviral Transmission in Ghana (2020)
  • 著者名/発表者名: Amoa-Bosompem Michael、Kobayashi Daisuke、Murota Katsunori、Faizah Astri Nur、Itokawa Kentaro、Fujita Ryosuke、Osei Joseph Harold Nyarko、Agbosu Esinam、Pratt Deborah、Kimura Shohei、Kwofie Kofi Dadzie、Ohashi Mitsuko、Bonney Joseph H. Kofi、Dadzie Samuel、Sasaki Toshinori、Ohta Nobuo et al.
  • 雑誌名: Viruses 巻: 12 ページ: 147～147
  • DOI: 10.3390/v12020147
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Deciphering the Virome of Culex vishnui Subgroup Mosquitoes, the Major Vectors of Japanese Encephalitis, in Japan (2020)
  • 著者名/発表者名: Faizah Astri Nur、Kobayashi Daisuke、Isawa Haruhiko、Amoa-Bosompem Michael、Murota Katsunori、Higa Yukiko、Futami Kyoko、Shimada Satoshi、Kim Kyeong Soon、Itokawa Kentaro、Watanabe Mamoru、Tsuda Yoshio、Minakawa Noboru、Miura Kozue、Hirayama Kazuhiro、Sawabe Kyoko
  • 雑誌名: Viruses 巻: 12 ページ: 264～264
  • DOI: 10.3390/v12030264
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Establishment and characterization of a cell line from Ghanaian Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) focusing on Aedes-borne flavivirus susceptibility (2020)
  • 著者名/発表者名: Amoa-Bosompem Michael、Kobayashi Daisuke、Itokawa Kentaro、Faizah Astri Nur、Kuwata Ryusei、Dadzie Samuel、Hayashi Takaya、Yamaoka Shoji、Sawabe Kyoko、Iwanaga Shiroh、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal 巻: 56 ページ: 792～798
  • DOI: 10.1007/s11626-020-00504-y
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] RNA virome analysis of questing ticks from Hokuriku District, Japan, and the evolutionary dynamics of tick-borne phleboviruses (2020)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Daisuke、Murota Katsunori、Itokawa Kentaro、Ejiri Hiroko、Amoa-Bosompem Michael、Faizah Astri Nur、Watanabe Mamoru、Maekawa Yoshihide、Hayashi Toshihiko、Noda Shinichi、Yamauchi Takeo、Komagata Osamu、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: Ticks and Tick-borne Diseases 巻: 11 ページ: 101364～101364
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2019.101364
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluating the competence of the primary vector, Culex tritaeniorhynchus, and the invasive mosquito species, Aedes japonicus japonicus, in transmitting three Japanese encephalitis virus genotypes (2020)
  • 著者名/発表者名: Faizah Astri Nur、Kobayashi Daisuke、Amoa-Bosompem Michael、Higa Yukiko、Tsuda Yoshio、Itokawa Kentaro、Miura Kozue、Hirayama Kazuhiro、Sawabe Kyoko、Isawa Haruhiko
  • 雑誌名: PLOS Neglected Tropical Diseases 巻: 14 ページ: e0008986
  • DOI: 10.1371/journal.pntd.0008986
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Occludin‐binding single‐chain variable fragment and antigen‐binding fragment antibodies prevent hepatitis C virus infection (2020)
  • 著者名/発表者名: Shimizu Yoshimi、Shinoda Takehiro、Shirasago Yoshitaka、Kondoh Masuo、Shinya Naoko、Hanada Kentaro、Yagi Kiyohito、Suzuki Tetsuro、Wakita Takaji、Kimura‐Someya Tomomi、Shirouzu Mikako、Fukasawa Masayoshi
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 595 ページ: 220～229
  • DOI: 10.1002/1873-3468.13975
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] キンイロヌマカのRNAウイルス叢解析および分離された新規フラビウイルスの性状解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 松村凌, 小林大介, 渡辺護, 比嘉由紀子, 沢辺京子, 伊澤晴彦, 糸山享
  • 学会等名: 第66回日本応用動物昆虫学会大会
• [学会発表] アオダイショウ由来培養細胞の性状解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 鍬田龍星, 黒木俊郎, 松井利康, 石嶋慧多, 立本完吾, 小林大介, 伊澤晴彦, 高野愛, 下田宙, 藤井ひかる, 畑明寿, 宇根有美, 森川茂, 前田健, 吉川泰弘
  • 学会等名: 第73回日本衛生動物学会大会
• [学会発表] キンイロヌマカから分離された新規フラビウイルスの性状解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 松村凌, 小林大介, 渡辺護, 比嘉由紀子, 沢辺京子, 糸山享, 伊澤晴彦
  • 学会等名: 第73回日本衛生動物学会大会
• [学会発表] ガーナ産ネッタイシマカ由来新規培養細胞系の樹立と性状解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 伊澤晴彦, マイケル・アモア-ボソムペム, 小林大介, 鍬田龍星, 糸川健太郎, アシトリ・ヌー・ファイザー, 岩永史朗
  • 学会等名: 第73回日本衛生動物学会大会
• [学会発表] Evaluation of the growth kinetics of Getah virus in a scope of mosquito cell lines (2021)
  • 著者名/発表者名: Azerigyik F, Kobayashi D, Amoa-Bosompem M, Faizah AN, Iwanaga S, Isawa H
  • 学会等名: 第73回日本衛生動物学会大会
• [学会発表] アオダイショウおよびシマヘビ由来培養細胞の性状解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 鍬田龍星，黒木俊郎，松井利康，石嶋慧多，立本完吾，小林大介，伊澤晴彦，高野愛，下田宙，藤井ひかる，宇根有美，森川茂，前田健，吉川泰弘
  • 学会等名: 第164回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] Evaluation of the growth kinetics of Getah virus in a scope of mammalian and mosquito cell cultures (2021)
  • 著者名/発表者名: Azerigyik FA, Kobayashi D, Amoa-Bosompem M, Faizah AN, Iwanaga S, Isawa H
  • 学会等名: American Society of Tropical Medicine & Hygiene 70th Annual Meeting
  • 国際学会
• [学会発表] Arbovirus surveillance and Japanese encephalitis virus genotype IV isolation from Culex vishnui mosquitoes collected on Bali Island, Indonesia (2021)
  • 著者名/発表者名: Faizah AN, Kobayashi D, Maekawa Y, Amoa-Bosompem M, Fauziyah S, Mulyatno KC, Subekti S, Rohmah EA, Lusida MI, Mori Y, Miura K, Hirayama K, Isawa H, Sawabe K
  • 学会等名: American Society of Tropical Medicine & Hygiene 70th Annual Meeting
  • 国際学会
• [学会発表] 蚊・マダニ由来培養細胞に潜在感染するウイルスの探索と同定 (2020)
  • 著者名/発表者名: 松村凌, 小林大介, Astri Nur Faizah, 糸山享, 伊澤晴彦
  • 学会等名: 第72回日本衛生動物学会大会
• [学会発表] ネッタイシマカのデングウイルス感受性関連遺伝子の解析 (2020)
  • 著者名/発表者名: 佐々木年則, ベルツーソ・G・アーリン，伊澤晴彦，高崎智彦, 皆川昇, 沢辺京子
  • 学会等名: 第72回日本衛生動物学会大会