| 研究課題/領域番号 |
18H02884
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
山本 雅一 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60220498)
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| 研究分担者 |
柳川 徹 筑波大学, 医学医療系, 教授 (10312852)
有泉 俊一 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (40277158)
徳重 克年 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60188729)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | NASH / 肝癌 / 遺伝子レスキューマウス / LPS / 腸管透過性 / 高カロリー食 |
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| 研究実績の概要 |
筑波大学と連携してNASHと肝癌を自然発症するSqstm1およびNrf2遺伝子二重欠失（DKO）マウスを用いて，腸内細菌の dysbiosisとLPS増加による肝発癌の誘導に対して，Keap1-Nrf2 pathwayの肝発癌の抑止の生体防御機構の詳細について解明している．
腸管上皮Nrf2の肝発癌における役割を明らかにするため，腸管上皮細胞にのみNrf2を発現する腸管上皮特異的Nrf2レスキューマウスの作製を試みた．Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出たが，Vill-Creマウスとの掛け合わせにより腸管上皮特異的Nrf2遺伝子レスキューマウス（最終遺伝子型Nrf2KI/KIかつVil-cre/+）の作製に成功した．今後，繁殖を継続する．
この間，DKOマウスに60%高脂肪食を26週間摂餌し肝発癌促進モデルを作製し，解析を行った．高脂肪食（HF）群は，通常食（NC）群と比較して更に高度肥満（HF:57.5 g，NC: 47.7 g）を呈し，NASH病態のSAF scoreでは脂肪化（HF: 2.2, NC: 0.9），炎症（HF: 1.9, NC: 0.8），線維化（HF: 3.9, NC: 0.6）といずれも高値であったが，特に線維化が高度であった．更に，HF群では35%（16例/46匹）に腫瘍が発生し，NC群の12%と比較して顕著に発癌が促進された．
本学消化器外科で外科手術により収集された，NASH肝癌50症例，慢性C型肝炎由来肝癌50症例，大腸癌肝転移50症例のヒト肝癌臨床標本について，HE染色，p62，Keap1，LC3Aの免疫染色を行った（Genostaff社に一部外部委託）．現在，免疫組織学的な視点から癌部非癌部の染色パターンを解析中である．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出たが，腸管上皮特異的Nrf2遺伝子レスキューマウスの作製に成功した．今後，繁殖を継続し実験
に供する．新規に作製したNrf2腸管特異的レスキューマウスの表現型について解析中である．
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| 今後の研究の推進方策 |
腸管上皮特異的Nrf2レスキューマウスについては，解析に十分な個体数が揃った段階で（各群10-20匹程度を想定），通常食を対照として60%高脂肪食摂餌を開始する．32週齢で解剖し，全身p62およびNrf2遺伝子二重欠失（DKO）マウスと，NASH肝癌の個数，大きさ，悪性度，病理学的特徴などの表現型を比較解析し，腸管上皮細胞のNrf2レスキューがNASHおよび肝発癌を抑止し得るかどうかを解析する．また，これらのマウスの糞便を回収して腸内細菌叢のプロフィールを解析し，血清・糞便中のLPS体内動態と腸管上皮細胞のNrf2がどのように関連するかを明らかにする．
ヒト肝癌臨床標本を用いた解析については，multiubiquitin, Masson trichromeの免疫染色を追加し，既に染色したp62，Keap1，LC3Aとの位置関係，発現パターンの相同性などについて引き続き解析を行う．また，免疫染色の解析結果と患者情報（病歴，血液検査結果，予後情報）などとの関係性について統計学的手法を用いて解析する．
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