| 研究課題/領域番号 |
18H02901
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
渡邉 栄三 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任教授 (40375639)
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| 研究分担者 |
幡野 雅彦 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (20208523)
伊藤 千鶴 千葉大学, 大学院医学研究院, 講師 (80347054)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 敗血症 / オートファジー / メタボローム解析 / バイオマーカー / 盲腸結紮穿孔 / 腹膜炎 |
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| 研究実績の概要 |
敗血症動物モデルとしてのマウス盲腸結紮穿孔腹膜炎(CLP)モデル作成手技に習熟し，安定して侵襲度をそろえたモデルを作成可能となった．対照には単開腹(sham)モデルを置き，両群のメタボローム/脂質網羅解析を行うべくマウス血漿検体採取を行った（未処置，sham 術後8時間, sham 術後24時間, CLP 術後8時間, CLP 術後24時間, 各群n=4）．
前年度に既に，下部消化管穿孔による腹膜炎/敗血症のヒト血漿を用いたメタボローム/脂質網羅解析のデータを集積しており，pathway解析，主成分解析などの手法も導入し，多方面から解析中である．そのデータとマウスのデータを比較することから，メタボロミクスから見た敗血症バイオマーカーを検索中である．
そして，時期特異的・肝細胞特異的にオートファジーを欠損させた，Alb-CreERT2/Atg5f/fマウスの凍結胚移植による作成が進んでおり，肝臓検体を用いて，オートファジー動態の観点からの敗血症バイオマーカーの絞り込みを進めてゆく予定である．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
コロナ禍のため，動物飼育施設の使用困難から，遺伝子改変マウスの作成に予期せぬ遅れが生じた．
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| 今後の研究の推進方策 |
敗血症マウスにおけるメタボローム解析（肝・血漿）を行う．
Ⅰ－1) C57BL/6J 野生型マウスのCLP（敗血症）とsham単開腹手術モデル（非敗血症）を術後8時間および24時間で比較し，包括的代謝プロファイリングを行う(各群n=4)．CLPは，23ゲージ針で盲腸を2回穿刺して作成し，現在データ解析中である．
Ⅰ－2) 時期特異的・肝細胞特異的にオートファジーを欠損させたAlb-CreERT2/Atg5f/fマウスにCLPを施行し，C57BL/6J 野生型のCLP施行マウスと比較し，敗血症刺激で変動するオートファジー関連代謝物を導出すべく包括的代謝プロファイリングを行う(各群n=4)．以上より，敗血症におけるオートファジー制御機構について，代謝プロファイリングより明らかにし，敗血症バイオマーカーとしての候補物質を同定する．血漿のメタボローム解析データについては，ヒト敗血症と野生型マウスCLPで，共通に変動しているものを同定する．
一方，マウスモデルの肝，リンパ球のオートファジー評価に関しては，LC-3/LAMP1染色による免疫組織染色と，電子顕微鏡所見を合わせて確認する．
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