| 研究課題/領域番号 |
18H02925
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| 研究機関 | 秋田大学 |
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研究代表者 |
藤田 香里 秋田大学, 理工学研究科, 講師 (10633092)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | p53 isoforms / Δ133p53 / 間葉系幹細胞老化 / 軟骨細胞分化 |
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| 研究実績の概要 |
研究の全体構想はΔ133p53を用いて高齢患者の老化間葉系幹細胞から効率よく移植用軟骨細胞を得る方法と老化軟骨細胞増殖促進の方法確立のための分子機構を解明し実際の培養方法確立へ繋げることである。具体的には、１）抗老化因子Δ133p53がどのように老化を制御して軟骨細胞に分化誘導するかについてΔ133p53過剰発現老化間葉系幹細胞から軟骨細胞に分化誘導後、及び２）老化軟骨細胞をどのように若返らせ増殖促進させるかについてΔ133p53過剰発現老化軟骨細胞を使用しRNAシーケンスとクロマチン免疫沈降シーケンスを行い明らかにする、３）内在性Δ133p53や見出された分子を増加させる低分子化合物をスクリーニングするための細胞評価系をゲノム編集技術による内在性タンパク質の可視化で構築する、の3つを行う。 継代培養を繰り返して細胞老化した(=senescent)ヒト間葉系幹細胞にΔ133p53を過剰発現させ、ベクターコントロールの老化細胞を実験回毎に作製した（計３回）。ベクターコントロール細胞とΔ133p53過剰発現細胞を軟骨細胞に分化誘導し、継時的(0、7、14、21、28日)にサンプリングした。それらを使い、RNAシーケンスにより変動遺伝子の解析を行った。さらに、得られたデータを詳細に解析し、それぞれの分化段階において、Δ133p53過剰発現に特徴的な発現変動を示す候補遺伝子を抽出した。今後は、それぞれの発現変動候補遺伝子とCut and Run シーケンスにより判明したΔ133p53結合部位近傍遺伝子を照らし合わせ、老化間葉系幹細胞が軟骨分化するメカニズムの全体を把握する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
所属機関の変更などにより、新たに研究環境の立ち上げが必要だったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
細胞若返りの指標となるΔ133p53の発現誘導可能なドラッグスクリーニングに向けた細胞評価系とスクリーニングの系の構築を行う。まずは、作製したベクターを導入する方法および、ポジティブコントロールの添加で系が動くことを確認する。
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