| 研究課題/領域番号 |
18H03197
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
有泉 俊一 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (40277158)
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| 研究分担者 |
徳重 克年 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60188729)
山本 雅一 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60220498)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
岡田 浩介 筑波大学, 附属病院, 病院講師 (80757526)
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | NASH / 遺伝子改変マウス / 肝発癌 / 遺伝子ノックイン / 脂肪酸代謝 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は，NASHおよびNASH肝癌モデル（筑波大学にて開発）において，肝発癌に対するNrf2およびp62抑止的役割を解明することを目的に研究を実施した．
1.組織細胞特異的p62およびNrf2遺伝子レスキューマウスの作製：p62およびNrf2遺伝子の
イントロンに，LoxP配列で挟まれた転写終結シグナルおよびpolyA付加シグナル配列を挿入したノックインマウス（p62 KI/KI, Nrf2KI/KI）を作製した．このマウスとp62-/-またはNrf2-/-マウスとの交配により，Nrf2KI/KIかつp62-/-マウスとp62KI/KIかつNrf2-/-マウスを得た（このマウスは，全身でp62およびNrf2遺伝子が二重欠損しており，NASHを発症する）．次に，組織特異的にp62とNrf2の発現をレスキューするために，Creマウスとの交配を行った．p62KIKIかつNrf2-/-系統（p62レスキュー）の作製繁殖を優先して行い，p62KIKIかつNrf2-/-かつAlbumin-cre/+マウス（肝細胞特異的p62レスキューマウス），p62KIKIかつNrf2-/-かつAdipoq-cre/+マウス（脂肪細胞特異的p62レスキューマウス），p62KIKIかつNrf2-/-かつLyz2-cre/+マウス（Kupffer細胞特異的p62レスキューマウス）の作製に成功した．
2．ヒト肝癌臨床検体を用いた解析：本学消化器外科で外科手術により収集された，NASH肝癌50症例，慢性C型肝炎由来肝癌50症例，大腸癌肝転移50症例について，HE染色，p62，Keap1，LC3Aの免疫染色を行った（Genostaff社に一部外部委託）．現在，免疫組織学的な視点から癌部非癌部の染色パターンを解析中である．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出ている．今後，準備が出来次第，組織特異的にNrf2の発現をレスキューするために，Vill-Cre（腸管上皮），Albumin-Cre（肝細胞），Adipoq-Cre（脂肪細胞），Lyz2-Cre（Kupffer細胞）マウスとの交配を開始する．これらの維持管理は筑波大学生命科学動物資源センターで管理を行っている．
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| 今後の研究の推進方策 |
1.組織細胞特異的レスキューマウスについては，解析に十分な個体数が揃った段階で（各群10匹程度を想定），通常食を対照として60%高脂肪食摂餌を開始する．32週齢で解剖し，全身p62およびNrf2遺伝子二重欠失マウスと，NASH肝癌についての表現型（個数，大きさ，悪性度，病理学的特徴）を比較解析し，どの組織（臓器）のp62もしくはNrf2が肝癌の発癌進展に重要であるか，あるいはどのように肝癌発生を抑止しているかを明らかにする．
2.ヒト臨床検体について，上記HE，p62，Keap1，LC3Aに加え，更にmulti-ubiquitin, Masson trichromeの免疫染色を行う．また，免疫染色の解析結果と患者情報（病歴，血液検査結果，予後情報）などとの関係性について統計学的手法を用いて解析する．
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