肉腫に対する新世代治療法の確立を志向した腫瘍血管傷害型CAR-T細胞の創薬化研究

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18H04018
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 岡田 直貴 大阪大学, 薬学研究科, 教授 (90312123)
• 研究分担者: 岡田 潔 大阪大学, 医学系研究科, 特任准教授 (40576279)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 細胞療法 / 腫瘍免疫 / キメラ抗原受容体 / 肉腫 / 血管新生

研究実績の概要

mRNA導入キメラ抗原受容体発現T (CAR-T) 細胞を用いた臨床研究の実施を目指し、最終的な開発候補品となるCAR-T細胞の決定とCAR-T細胞輸送条件の整備を進めた。まず、T細胞に導入するヒト血管内皮細胞増殖因子受容体-2 (hVEGFR2) 特異的CAR mRNAのコンストラクトの最適化検討を実施し、CAR発現強度や発現期間の向上ならびにCARの抗原性低下につながる配列を決定した。この選定されたmRNAを用いて製造したhVEGFR2特異的CAR-T細胞開発候補品の輸送条件を検討したところ、凍結保存および輸送はCAR-T細胞のin vitroエフェクター機能を大きく減弱させたことから、CARを介した殺細胞効果の発揮が一過性となるmRNA導入CAR-T細胞にとって凍結保存は不適であると判断された。実臨床で使用できる凍害保護試薬が限られるため凍結輸送の代替策が必要となり、一連の検討から4℃での低温輸送が最もhVEGFR2特異的mRNA導入CAR-T細胞の細胞生存率やin vitroエフェクター機能を保持しつつ患者の元へと輸送できる条件であると判断した。本輸送条件を適用したhVEGFR2特異的mRNA導入CAR-T細胞のin vivoにおける有効性を検証するために、NOGマウスに移入したhVEGFR2発現L1.2細胞に対する排除効果を解析したところ、投与から2日間で20%のターゲット細胞を排除することができた。以上のように、hVEGFR2特異的CAR-T細胞の最終開発品の選定とその製造・輸送条件の決定が完了したことにより、今後、本細胞医薬を用いた腫瘍血管傷害型CAR-T細胞療法のFirst in human試験の実施体制を整備する予定である。

現在までの達成度 (段落)

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Structure of the Signal Transduction Domain in Second-Generation CAR Regulates the Input Efficiency of CAR Signals (2021)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kento、Kitaura Masaki、Tsunei Ayaka、Kusabuka Hotaka、Ogaki Erika、Okada Naoki
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 22 ページ: 2476～2476
  • DOI: 10.3390/ijms22052476
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Predicting the Efficacy and Safety of TACTICs (Tumor Angiogenesis-Specific CAR-T Cells Impacting Cancers) Therapy for Soft Tissue Sarcoma Patients (2020)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kento、Sasawatari Shigemi、Nakai Sho、Imaeda Keisuke、Nagai Seina、Matsuno Yoshihiro、Hatanaka Kanako、Hatanaka Yutaka、Takenaka Satoshi、Okada Naoki
  • 雑誌名: Cancers 巻: 12 ページ: 2735～2735
  • DOI: 10.3390/cancers12102735
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development and functional analysis of an anticancer T‐cell medicine with immune checkpoint inhibitory ability (2020)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kento、Shigematsu Kazuki、Tachibana Masashi、Okada Naoki
  • 雑誌名: IUBMB Life 巻: 72 ページ: 1649～1658
  • DOI: 10.1002/iub.2280
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Impact of scFv structure in chimeric antigen receptor on receptor expression efficiency and antigen recognition properties (2020)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kento、Masutani Mizuki、Tachibana Masashi、Okada Naoki
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 527 ページ: 350～357
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2020.03.071
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hinge and Transmembrane Domains of Chimeric Antigen Receptor Regulate Receptor Expression and Signaling Threshold (2020)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kento、Tsunei Ayaka、Kusabuka Hotaka、Ogaki Erika、Tachibana Masashi、Okada Naoki
  • 雑誌名: Cells 巻: 9 ページ: 1182～1182
  • DOI: 10.3390/cells9051182
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 抗原親和性の異なる抗Robo4 CAR-T細胞間での抗腫瘍効果の比較 (2021)
  • 著者名/発表者名: 長井聖奈, 立花雅史, 岡田直貴
  • 学会等名: 日本薬学会第141年会
• [学会発表] 軟部肉腫に対する腫瘍血管障害性CAR-T細胞療法の奏功予測研究 (2020)
  • 著者名/発表者名: 中井 翔, 藤原健人, 今枝啓輔, 長井聖奈, 安田直弘, 前 裕和, 王谷英達, 濱田健一郎, 岡田直貴, 竹中 聡
  • 学会等名: 第53回日本整形外科学会 骨・軟部腫瘍学術集会
• [学会発表] 固形がんに対する抗Robo4 CAR-T細胞療法の開発に向けた基礎的検討 (2020)
  • 著者名/発表者名: 長井聖奈, 藤原健人, 立花雅史, 岡田直貴
  • 学会等名: 第36回日本DDS学会学術集会