| 研究課題/領域番号 |
18H04057
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
小田 竜也 筑波大学, 医学医療系, 教授 (20282353)
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| 研究分担者 |
下村 治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (60808070)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 膵癌 / レクチン / 糖鎖 / レクチンー毒物融合体 |
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| 研究実績の概要 |
本課題は膵癌を始めとする難治癌に対して、癌細胞の最外層を覆う糖鎖層(glycocalyx)をレクチン(糖鎖結合蛋白)で標的するという、全く新しい概念に基ずく新規がん治療法の具現化を目指している。膵がん細胞の最外層を覆う癌特異的糖鎖構造(フコース化Htype3構造)に結合するBC2レクチンに緑膿菌外毒素(PE38)を結合させたLectin Drug Conjugate (LDC)は、in vitro及び in vivoで非常に強い抗腫瘍効果を発揮することを確認し、膵癌マウスモデルで多くの基礎的な知見を得てきた。 BC2レクチンは１６KDのタンパク質であるが、３量体を形成してフコース化Htype3構造に結合する事が知られている。今まで独自に、及び、検査試薬メーカーの協力を得てLDCを精製して研究に利用してきたが、このnon-GLPグレードのLDCには3量体だけでなく、多くの２量体、１量体といった不完全な夾雑物が混じってしまう事が分かっていた。今回、新たに国内大手製薬メーカーと共同開発契約を結び、精製方法を１から見直し、ほぼ純粋な３量体を得ることに成功した。3量体のLDCのIC50は485.3fg/ml (0.49pg/ml)であり、non-GLPグレードのLDC（240fg/ml (1.04pg/ml)）のほぼ倍の活性を持つことを明らかにできた。本年度は、さらにレクチンに蛍光物質を標識した光イメージングにも挑んだ。蛍光物質IRDye700DX(IR700)をレクチンに標識した後、in vivoイメージング装置(IVIS spectrum)で評価を行っ た。膵癌細胞株を皮下移植したXenograftマウスに経静脈投与したところ、比較的すみやかな尿路排泄を示すと同時に、腫瘍への強い集積を確認することができた。また、膵癌臨床検体から20系統の３Dオルガノイドバンクの樹立をし終えた。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
3: やや遅れている
理由
今まで独自に、及び、検査試薬メーカーの協力を得て精製し研究に利用してきたnon-GLPグレードのLDCには、3量体だけでなく、多くの２量体、１量体といった不完全な夾雑物が混じってしまう事が分かっていた。その不完全なLDCを使って研究を進めても、得られるデータの精度に疑問が残るので、国内大手製薬メーカーと共同開発契約を結び、GMPグレードでほぼ純粋な３量体からなるLDCを得ることができた。この精製方法の見直しに時間を要し、全体の研究進捗がやや遅れた。
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| 今後の研究の推進方策 |
R3年度は、 R2年度に樹立した膵癌3Dオルガノイドバンク(20系統)を使い、ほぼ純粋な３量体からなるGMPグレードのLDCを使って薬剤感受性試験を完成する。また、R2年度中期から追加で開始した実験で、Type 1/3糖鎖が表出しているタンパク(=キャリアタンパク)が、正常細胞とがんでは異なる可能性を把握しており、R 3年度はがん特異的なType 1/3糖鎖のキャリアタンパクの同定を目指す。さらに、 膵癌患者血清中には、rBC2レクチンに反応するタンパク、エクソソームが優位に多く浮遊しているというエビデンスも得ており、rBC2レクチンを使った新規膵癌診断法の開発にも取り組む。本研究課題はもともとrBC2レクチンに緑膿菌毒素(PE38)を結合したLDCをシーズ分子として研究を計画、開始しているが、rBC2単独では毒性がほとんどない事から、rBC2レクチンに蛍光物質を結合させて光免疫療法が可能か、その発展性についても探る。
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