| 研究課題/領域番号 |
18H04064
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
小川 修 京都大学, 医学研究科, 教授 (90260611)
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| 研究分担者 |
山崎 俊成 京都大学, 医学研究科, 講師 (00607749)
赤松 秀輔 京都大学, 医学研究科, 助教 (20767248)
齊藤 亮一 京都大学, 医学研究科, 助教 (30792270)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 薬剤抵抗性 / 腫瘍間質相互作用 / 転移形成 / 患者組織由来ゼノグラフト |
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| 研究実績の概要 |
ヒト癌に対して新しい分子標的治療や免疫治療が開発されているが、治療抵抗性や転移形成は避けられず、従来とは異なったアプローチによる革新的な診断・治療シーズの開発が求められている。
近年、癌の浸潤・転移における腫瘍間質相互作用の重要性が認識されており、情報伝達媒体としてエクソソームが注目されている。生体内エクソソーム解析の手段として新鮮組織の培養で得られる濃縮されたエクソソームの有用性が報告されているが、癌間質由来のものが混在し解析を困難にしている。
今年度、スニチニブ抵抗性・耐性機序の研究では、患者組織由来腎癌ゼノグラフトモデル(KURC1)のスニチニブ治療奏功時、治療抵抗性獲得時の組織を採取し、その培養液からエクソソームを回収する系を確立した。全RNAシーケンス(mRNA, lncRNA)および3D-Gene miRNAチップを用いたmiRNA解析を行いヒト由来のRNAで変化のあるものを抽出する。さらに、我々はKURC1,3の組織についてはヒトおよびマウス遺伝子のDNAマイクロアレイ、KUCaP2,4,6,7については全RNAシーケンスデータを有しているため、本研究ではエクソソームおよび癌組織、間質組織のパスウェイ解析で重複する経路に着目して腫瘍間質相互作用の中心となる因子を絞り込む。
また、転移形成機序の研究では、親株と骨転移指向性を高めた細胞株のそれぞれの培養液からエクソソームを回収する系を確立した。それらのタンパクの二次元電気泳動から異なる濃度のスポットを同定した。質量分析により骨転移指向性との関連が示唆される情報伝達物質を網羅的解析で絞込、それらについて機能解析を今後行う計画としている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度、スニチニブ抵抗性・耐性機序の研究では、患者組織由来腎癌ゼノグラフトモデル(KURC1)のスニチニブ治療奏功時、治療抵抗性獲得時の組織を採取し、その培養液からエクソソームを回収する系を確立した。現在、それらのエクソソームからmiRNAの抽出を行っている。今後これらの網羅的解析からエクソソームおよび癌組織、間質組織のパスウェイ解析で重複する経路に着目して腫瘍間質相互作用の中心となる因子を絞り込むこととしている。マウスの皮下に移植した腫瘍にエクソソームが取り込まれる系を確立した。今後、マウスでの表現型がエクソソーム投与により変化するかを確認していくことを計画している。
また、転移形成機序の研究では、親株と骨転移指向性を高めた細胞株のそれぞれの培養液からエクソソームを回収する系を確立した。それらのタンパクの二次元電気泳動から異なる濃度のスポットを同定した。これらのスポットからタンパクを抽出し質量分析によって一部は同定できている。現在、さらに高精度のLC/MSでの解析も加えて骨転移指向性との関連が示唆される情報伝達物質を絞込み、それらについて機能解析を今後行う計画としている。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度、スニチニブ抵抗性・耐性機序の研究では、患者組織由来腎癌ゼノグラフトモデル(KURC1)のスニチニブ治療奏功時、治療抵抗性獲得時の組織を採取し、その培養液からエクソソームを回収する系を確立した。現在、それらのエクソソームからmiRNAの抽出を行っている。今後これらの網羅的解析からエクソソームおよび癌組織、間質組織のパスウェイ解析で重複する経路に着目して腫瘍間質相互作用の中心となる因子を絞り込むこととしている。それに加えて、SCIDマウスに移植した腫瘍に抵抗性獲得時の腫瘍由来のエクソソームを投与しスニチニブの治療効果が変化するかを評価することを計画している。
また、転移形成機序の研究では、親株と骨転移指向性を高めた細胞株のそれぞれの培養液からエクソソームを回収する系を確立した。それらのタンパクの二次元電気泳動から異なる濃度のスポットを同定した。これらのスポットからタンパクを抽出し質量分析によって一部は同定できている。現在、さらに高精度のLC/MSでの解析も加えて骨転移指向性との関連が示唆される情報伝達物質を絞込み、それらについて機能解析を今後行う計画としている。マウスの心腔注射モデルにおいて骨転移指向性株由来エクソソームが骨転移形成に影響を与えるかを評価していく計画としている。
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