| 研究実績の概要 |
本研究はゴールデンハムスターを解析モデルとして，哺乳類の「雌の生殖細胞」におけるPIWI-piRNAの分子機能解明を目的としている．本年度は以下に挙げる3つの成果を挙げた．
1. ハムスターにおけるゲノムデータの構築：ハムスターのリファレンスゲノムは公開されているものがあるが，ATGC以外を意味する”N”が全体の約20%を占めており，特にトランスポゾンをはじめとするリピート領域がアセンブルできておらず，piRNAの解析に不向きであることが問題であった．そこでPacBio Sequel用いたゲノムアセンブリを試みた結果，シーケンスは約100Xカバレッジの深度を得ることに成功し，アセンブルによって約3,000本のscaffoldを得ることができた．
2. ハムスターにおけるPIWI-piRNAの単離および解読：我々はこれまでに高品質な抗PIWIL1, PIWIL2, PIWIL3モノクローナル抗体の作製に成功し，PIWIL3はMII oocyteのみで19-21塩基長の非常に短いRNAが結合していることや，PIWIL1はMII oocyteから2-cell embryoにかけて結合するpiRNA群の塩基長が短くなることを明らかにした．今年度はこれらをより詳細に解析するため，超並列シーケンサーを用いてPIWIL1およびPIWIL3にそれぞれ結合するpiRNA群の配列を解読した．
3. MII oocyteにおけるPIWIL3の分子量変化の解析：我々はこれまでに，PIWIL3タンパク質がMII oocyteでのみ分子量が増加することを明らかにしたが，これが何によって引き起こされているのかは不明であった．そこでこの原因を明らかにすべく，抗体や酵素を用いた生化学実験をおこなった．結果，リン酸化修飾を受けていることが明らかとなった．
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