| 研究課題/領域番号 |
18J22455
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
大谷 祐紀 北海道大学, 大学院獣医学院, 特別研究員(DC1)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-25 – 2021-03-31
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| キーワード | 自己免疫疾患 / 精巣 / 精子発生 / アポトーシス / Yaa変異 |
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| 研究実績の概要 |
哺乳類において、自己免疫と生殖システムは密接に関連する。精巣において、血液精巣関門や間質細胞がつくる免疫抑制環境は、精細胞を全身免疫から保護する。一方で、性ホルモンは免疫細胞上に発現する受容体を介し、免疫機能を制御する。この両者の密接な関係は、一方の破綻による他方の機能破綻をもたらす。本研究では、自己免疫と雄性生殖システムの破綻がもたらす病態メカニズムの解明から、両システムの関連性を考察することを目的とする。本年度は自己免疫疾患モデルの雄性生殖システムを組織学的に考察した。
自己免疫疾患モデルとして12週齢の雄BXSB/MpJ-Yaaマウス(BXSB/Yaa)を用いた。BXSB/YaaはX染色体Ofd1-Mid1領域のY染色体への重複(Yaa変異)を有し、雄で重篤な自己免疫疾患を発症する。対照として同齢のC57BL/6Nマウス(B6)とBXSB/MpJ-Yaa+(BXSB)を用いた。
BXSB/Yaaの血中抗double-stranded(ds)DNA自己抗体濃度は対照群よりも有意に高く、その自己免疫異常が示された。組織観察において、BXSB/Yaaでは精上皮ステージXIIの曲精細管内でsingle-stranded(ss)DNA陽性アポトーシス細胞が高率に観察され、曲精細管面積あたりの陽性細胞数は対照群よりも有意に高かった。Yaa変異に含まれる全15蛋白コード遺伝子のうち、Toll-like receptor7(Tlr7)mRNA発現量が、対照群よりもBXSB/Yaaで有意に高値を示した。
BXSB/Yaaは自己免疫疾患モデルマウスとしてこれまでも用いられてきたが、精巣表現型については不明であった。精上皮ステージXII特異的アポトーシス細胞の増加は他の自己免疫疾患モデルマウスにも共通してみられる表現型であり、Tlr7を候補分子とした更なる考察が必要であると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、自己免疫疾患モデルマウスの精巣表現型を組織学的に解析した。さらに、原因因子候補としてYaa領域遺伝子に着目し、Tlr7を候補分子として選出した。また、精巣摘出モデルを作出・飼育しており、次年度の採材および解析は予定通り実施できると考えられる。以上より、課題全体について当初の計画通り進捗していると評価している。
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| 今後の研究の推進方策 |
免疫染色によりTLR7の精巣内の局在を同定するとともに、ウエスタンブロッティング法により、その蛋白発現量を系統間で比較する。さらに、24週齢のマウスについても同様の解析を行い、自己免疫疾患の重篤度と精巣表現型との相関を考察する。精巣上体、精管、副生殖腺の分子組織学的変化および精子の運動能を精査し、BXSB/Yaaの雄性生殖機能の全容解明を目指す。また、6-12か月齢のTlr7ノックアウトマウスについて表現型解析を行う。精巣、精巣上体、精管および副生殖腺、また各免疫担当臓器について、1年目と同様の解析を行い、TLR7の雄性生殖システムにおける機能を考察する。
12および24週齢の精巣摘出群について各臓器を採材し、特に自己免疫疾患の指標として脾重量／体重比、血中自己抗体・抗精子抗体濃度を測定し、病理組織評価として腎炎スコアを定量する。精巣摘出がBXSB/Yaaの表現型に与える影響を考察する。
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