| 研究実績の概要 |
RNAのメチル化修飾であるm6A修飾は古くから存在が知られていたが、最近になりようやくその生理学的な重要性が明らかとなり、m6A修飾による遺伝子発現制御の仕組み解明が重要な課題となっている。
体内時計の制御はm6A修飾が関与する重要な生理機能の一つである。体内時計を制御する複数の時計遺伝子の中でも、Csnk1d遺伝子のmRNAは非翻訳領域において高頻度でm6A修飾されている。この領域を部分的に欠損させた遺伝子改変マウスはCsnk1dタンパク質が増加し、体内時計の周期が野生型マウスよりも長くなることをこれまでの研究で明らかにした（Fustin, Kojima, Itoh et.al., PNAS 2018 申請者は共同第二著者）。しかし、Csnk1dタンパク質が増加するメカニズムはまだ十分に解明されておらず、m6A修飾による遺伝子発現制御の仕組みを解明する上で重要である。そこで、m6A修飾の有無によりCsnk1dのmRNAに結合するタンパク質が変わるという仮説を立て、本年度は結合パターンが変化するタンパク質を検出するための実験手法の最適化を進めた。
まず、細胞内で作られるCsnk1dのmRNAに結合するタンパク質を回収する方法として、Csnk1dのmRNAに結合するDNAを用いる手法とCsnk1dのmRNAに結合する合成タンパク質を用いる手法を試みた。しかし、これらの手法はCsnk1dのmRNAを効率的に回収できないことが明らかとなった。
そこで、m6A修飾が有る状態と無い状態のCsnk1d m6A修飾周辺配列を人工的に合成し、それらに結合するタンパク質を検出する手法を検討した。その結果、この手法では効率的にmRNAと結合するタンパク質を回収することが出来ており、今後これらのタンパク質を網羅解析することでCsnk1dの発現を制御する分子が特定できる可能性がある。
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