研究課題
多くの動物細胞において細胞内Cl濃度を調節するのに重要だとされているK-Cl共輸送体(KCC2)と、Na-K-2Cl共輸送体(NKCC1)において、まず、Clの取り込みに重要なNKCC1がバソプレッシン（AVP）ニューロンに発現しているか否かについて検討した。AVPニューロン10個からなるサンプルを用いてRT-PCRを行った結果、AVPニューロンにNKCC1が発現していることを確認した。アストロサイトから分泌されたタウリンのGABAA受容体における影響を検討するため、AVPニューロンの局在する視索上核（SON）におけるGABAA受容体の発現をRT-PCR法を用いて検討した。その結果、すべてのタイプの受容体がSONに発現していることが確認された。AVP分泌メカニズムにおいて、電位依存性Caチャネルが重要であると報告されている。そこで、AVPニューロンにおける電位依存性Caチャネルの発現についてRT-PCRを行った結果、すべてのタイプの電位依存性Caチャネルが発現していることが確認された。パッチクランプ法を用いて、どのタイプの電位依存性Caチャネルが機能的に発現しているのか否かについて検討した。その結果、T型とN型の電位依存性Caチャネルが機能的に発現していることが明らかになった。フルフェナム酸（FFA）は、L型 Caチャネルを抑制する事が知られているが、他の電位依存性Caチャネルを抑制するのか否かについては不明である。そこで、電位依存性Caチャネルに対するFFAの効果をパッチクランプ法で検討した。その結果、AVPニューロンにおいて記録されるT型とN型の両方の電位依存性Caチャネルの電流がFFAによって抑制される事が明らかになった。これらの実験結果から、T型 とN型の電位依存性 Caチャネルは、共にAVPニューロンに機能的に発現し、FFAに抑制されることが明らかになった。
2: おおむね順調に進展している
昨年度は、バソプレッシン（AVP）ニューロンの細胞内塩化物イオンの高濃度維持寄稿に関与する可能性のある膜タンパク質の発現を、10個のAVPニューロンからなるサンプルを用いてPCRすることにより、網羅的に検討する事ができた。また、AVPニューロンの非常に重要な役目であるAVP分泌に関与している電位依存性Caチャネルのうち、機能的に発現しているタイプをパッチクランプ法により検討し、Ｎ型とＴ型の2つの電位依存性CaチャネルがAVPの分泌に重要な役割を担っていることを明らかにした。これらの結果の1部は、平成31年3月に行われた国際学会のポスター部門で発表している。以上の進捗状況から、本研究における課題は着実に遂行されており、当初の予定をおおむね順調に進展していると考えている。
当初の予定通り研究を進めていく方針である。また、昨年度に明らかにした、AVP分泌メカニズムに関する研究結果について、足りないデータを追加し、論文の投稿準備を進める予定である。
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Pharmacological Review
巻: 71 ページ: 49-88
10.1124/pr.118.015917
Current Topics in Membranes
巻: 印刷中 ページ: 印刷中
10.1016/bs.ctm.2019.03.001
