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2021 年度 実績報告書

エボラウイルスの選択的複製阻害剤を用いた複製機構の解明と創薬基盤の構築

研究課題

研究課題/領域番号 18K05985
研究機関日本大学

研究代表者

小川 健司  日本大学, 生物資源科学部, 教授 (50251418)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2022-03-31
キーワード感染症 / ケミカルバイオロジー
研究実績の概要

二分子化学発光相補反応を利用し、EBOVのRNP構成タンパク質の相互作用を数値化する評価系を構築した。海洋性カイアシ由来の分泌型ルシフェラーゼ(Gluc)のN末端またはC末端の分割断片と、RNP構成タンパク質との融合タンパク質発現プラスミドを構築した。これらのプラスミドを組み合わせてHeLa細胞に導入し、24時間培養後に上清中のルシフェラーゼ活性を測定することにより、タンパク質間相互作用や多量体形成の数値化の可否を検討した。VP35およびVP30のSpli-Gluc融合タンパク質を用いた実験では、培養上清中に高いレベルのルシフェラーゼ活性が認められ、VP35およびVP30のホモ多量体形成が数値化し得ることが示された。同様の実験により、VP35とダイニン軽鎖LC8との相互作用も確認された。NPの各構造領域とSpli-Gluc融合タンパク質を用いた実験により、Core domainのN-lobe領域同士に強い相互作用が認められ、この領域がNPの多量体形成に重要である可能性が示唆された。また、N-lobe領域とVP35の相互作用も認められた。次に、VP35評価系を384-well plateに対応した高速評価系に展開し、東京大学創薬機構の約21万化合物の大規模スクリーニングを実施した。二次スクリーニングではEBOVのミニゲノムを用いた化合物の評価を実施し、EBOVの複製を濃度依存的に阻害する13化合物を選抜した。これらのヒット化合物は、新規抗エボラウイルス病薬として応用される事が期待される。 また我々は、EBOVタンパク質の創薬標的としての可能性に着目し、EBOVの複製を阻害する変異型EBOVタンパク質の作製を試みた。我々が開発したEBOVミニゲノムアッセイを用いて、変異型EBOVタンパク質の発現が、EBOV複製に及ぼす効果を検討した結果、ある特定の変異型EBOVタンパク質を発現させると、EBOVの複製が阻害されることを見出した。この成果は「フィロウイルス科ウイルス複製阻害剤」として特許を出願した。抗EBOV新規創薬への応用が期待される。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2022

すべて 産業財産権 (1件)

  • [産業財産権] フィロウイルス科ウイルス複製阻害剤2022

    • 発明者名
      小川健司
    • 権利者名
      国立研究開発法人理化学研究所
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      特願2021-010636

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公開日: 2022-12-28  

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