| 研究課題/領域番号 |
18K06002
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| 研究機関 | 酪農学園大学 |
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研究代表者 |
桐澤 力雄 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (70153252)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 馬媾疹 / 馬ヘルペスウイルス3型 / 貼るワクチン / 迅速診断法 |
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| 研究実績の概要 |
馬媾疹は、馬ヘルペスウイルス3型（EHV3）に起因し、主に交配で伝播する。本病を発症すると外部生殖器に丘疹や水疱が生じ、痛みを伴うため交配が2～3週間不可能となり、交配料の高い種牡馬では数億円の損害に達する。本研究では本病を現場で迅速に診断できるEHV3検出キットの開発と生殖器への感染防御を目的として感染防御抗原をコードするmRNAを微小針に封入した貼るワクチンによる経皮ワクチンを開発する。令和2年度の研究で以下の成績を得た。
１．EHV3検出キット開発
EHV3に対するモノクローナル抗体（MoAb）を30種類得た。そのうち、抗体のサブタイプがIgGのもの18種類について、認識するウイルス蛋白を調べたところ、15種類がエンベロープ糖タンパクgB、2種類がgJそして1種類がgCであった。gBに対するMoAbのエピトープを競合ELISAで解析したところ、4種類のグループに分類された。それらのグループからgBとの反応性が高いMoAbを各1種類選択した。サンドイッチELISAで捕捉抗体および検出抗体で使用するMoAbを決定した。これをイムノクロマトを原理とする検出系に応用して迅速診断キットを完成させた。
２．経皮ワクチン開発
前年度の研究で感染防御抗原の候補としてgB、gD、gGとgIが示された。これらのうちgBについてPCRでT7プロモーターが5'端に付与されるようにコード領域を増幅した。これを鋳型にmRNAを合成し、培養細胞にトランスフェクトしてgBを発現させたが、十分な発現量がみられなかった。現在、mRNAの発現系の検討を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
効率の良いｍRNA発現方法の確立に時間を要しているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
4種類のワクチン候補蛋白、gB、gD、gGとgIをそれぞれコードする遺伝子をmRNA合成用プラスミドにクローニングしてmRNAを大量に合成する。mRNAの細胞内の安定性を高めて蛋白発現量を多くするため、UTPの代わりに1-methylpseudouridine-5’-triphosphateを用いる。皮膚に接すると溶解する素材でできた微小針内にそれらのmRNAを封入し、貼付け型経皮ワクチンとする。この工程は京都のメーカーと共同して行う。試作したワクチンは野外馬に応用し、抗体の誘導能を中和試験等で調べる。その成績をもとに、ワクチンを構成するmRNAの組み合わせを決定し、最終候補ワクチンとする。再度、野外試験を実施して、抗体の誘導能を確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
所期の研究成果を上げるため、研究期間を１年間延長したため。
研究費は、mRNAワクチン開発のために使用する。
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