| 研究課題/領域番号 |
18K06027
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
伊藤 禎洋 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (30345722)
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| 研究分担者 |
長友 啓明 山梨大学, 大学院総合研究部, 講師 (30746813)
神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | アレルギー / 免疫反応の系統差 / 皮膚疾患 / 肥満と突然死 |
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| 研究実績の概要 |
我々は、当初、抗核抗体価の上昇を指標として、C57BL/6系統の遺伝子背景（Apcs-/-; 129/Sv//Ev × C57BL/6）に存在する129/Sv//Ev領域｛D1Mit36（76.73cM）からD1Mit115（82.78cM）｝の免疫に関係する遺伝子群をランダムに20遺伝子、ゲノム編集法で破壊する予定でいた。そのため、ホモ個体1匹について、全ゲノムシーケンスを行った。
しかし、Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Aug 22;114(34):9158-9163.Complete overview of protein-inactivating sequence variations in 36 sequenced mouse inbred strainsの論文より、C3H/Heマウスは、LPS刺激、IL1α経由の感染に対して耐性であると解った。このことにより、C3H/He系統の遺伝子背景では、炎症のシグナルが入らないために抗核抗体値上昇が起きないのであろうと強く推測された。
従って、同じように、ゲノム編集法で破壊した遺伝子が、抗核抗体価の上昇に関わる遺伝子であるか否かが解るが、抗核抗体値上昇の原因であるとは、到底、結論出来ないと解った。
また、ホモ個体群を飼育するうちに、1年半をすぎて、肥満して突然死する個体、及び前脚と後脚の間の腹部を体液が出る程、掻きむしる個体がでてきた。免疫に関わると思われる表現系が現れたことで、まず皮膚アレルギー発症を疑って、リアルタイムPCRによる解析を行うことにした。
しかしながら、コロナウィルス感染症蔓延の影響で、使用予定のキット・プラスチック消耗品の入荷が遅れ、加えて。動物実験施設改修の影響を受けてしまった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
ホモ個体1匹について、全ゲノムシーケンスを行った。
表現型解析に方針転換したため、ホモ個体群、野生型個体群を、肥満する個体、及び前脚と後脚の間の腹部を体液が出る程、掻きむしる個体等に分類して、多数のマウスを観察・撮影・測定等を行いながら長期間飼育する必要が出てきた。リアルタイムPCR解析においても、マウス白血球からのmRNA 抽出は、量が取れないために、やはり飼育個体数の増加が必要になってきている。
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| 今後の研究の推進方策 |
今までは、ホモ個体群中に前脚と後脚の間の腹部を体液が出る程、掻きむしる個体を観察していたが、ホモ・野生型個体に対して掻痒惹起物質（Comppund 48/80等)を投与して、遺伝型の違い、及び投与する月齢に差をつけて、実験を行う。２週ごとの体重測定、掻痒部分の撮影を行う。またリアルタイムPCR解析の為に、半年、1年、1年半のホモと野生型個体の白血球、脾臓、リンパ節、肝臓、皮膚からRNA抽出を行う。加えて、血清を採取して抗核抗体測定を行う。
今後、マウスを飼育している本学動物実験施設の改修のため、飼育場所の確保が、困難になると予想されるので、マウスより採取した細胞で、実験が進められるか検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
飼育しているマウスに新たな表現系（皮膚アレルギー）が、出た事で、その表現系解析に研究方針が変わった。
新型コロナウイルス感染症蔓延の為、使用キット、プラスチック消耗品の入手が遅れた。加えて、県外へ出る学会出張を控えた為である。
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