研究課題
屠場由来の腫瘍細胞について、まずＢＬＶ感染の有無について検索した。腫瘍細胞10例のうち1例のみ陰性であった。ＢＬＶ感染が確認された材料のＤＯＫ遺伝子の検索では、ＤＯＫ２遺伝子の発現が健康牛にくらべて低下しているにもかかわらず、ＢＬＶ陰性肉腫ではＤＯＫ２の発現が高かった。マウスのＤＯＫ遺伝子に関する報告では、免疫細胞によって各ＤＯＫ遺伝子の発現は異なるとされ、Ｔ細胞は主にＤＯＫ１およびＤＯＫ２、Ｂ細胞はＤＯＫ１およびＤＯＫ３、骨髄系細胞はＤＯＫ１、ＤＯＫ２およびＤＯＫ３をすべて発現すると報告されている。そこで健康牛における末梢血リンパ球をＣＤ２１（成熟Ｂ細胞）の抗体を用いて、ＣＤ２１陽性分画とＣＤ２１陰性分画に分け、ＤＯＫ遺伝子発現レベルを比較したところ、マウスで報告されているのと同様、ＣＤ２１陽性分画では、ＤＯＫ２遺伝子の発現は低い値を示し、ＣＤ２１陰性分画では、逆にＤＯＫ２は高い値を示した。このことはマウスで示された発現パターンとウシも同様と示唆される。牛白血病由来細胞株であるＫＵ－１では極端なＤＯＫ２遺伝子の抑制が観察されるが、野外のＢＬＶ腫瘍細胞でも同様の値を示すものがあることが確認され、ＢＬＶ感染腫瘍株では、正常のＢ細胞より発現が低下していることが明らかとなった。一方、ＤＯＫ１についても低下しており、各細胞でのＢＬＶ発現レベルとの関連についても詳細に解析する必要があると考えられる。タンパクレベルの解析では、ウェスタンブロット法によってウシ末梢血白血球分画よりＤＯＫ１およびＤＯＫ２を微弱ではあるが検出可能な市販抗体を得ることができたが、ＤＯＫ３に関しては昨年同様ほとんど解析可能な抗体を得ることができなかった。
3: やや遅れている
ウシにおけるＤＯＫ１、ＤＯＫ２およびＤＯＫ３の血液免疫細胞での各遺伝子発現レベルが、従来報告されてきたマウスとほぼ同じであることが確認できたことは大きな成果であったが、タンパクレベルの解析では、昨年と同様、解析可能なＤＯＫ３抗体を得ることができなかった。
ウシにおけるＤＯＫ１、ＤＯＫ２およびＤＯＫ３の血液免疫細胞でのタンパクレベルの検索は、良い抗体が必要である。ＤＯＫ１およびＤＯＫ２については微弱ながら解析可能な抗体が得られ、ＢＬＶ由来腫瘍細胞株および野外材料についてタンパクレベルも含めて解析する。ＤＯＫ３に関しては市販の抗体では検出できず新たに抗体を作製する必要があるが、長時間を要することが考えられるため、検索レベルをまず遺伝子の発現とする。ウシにおける正常なＤＯＫ遺伝子発現レベルを、例数を増やし解析するとともに野外材料についても解析をさらに進める。
ウシにおけるＤＯＫの遺伝子およびタンパクレベルの解析において、とくにＤＯＫタンパク検出確認作業に時間がかかり、新たな実験系を立ち上げることができなかった。そのため物品費等の支出が少なかった。次年度は、タンパクレベルでの検索についてはＤＯＫ３をはずして、正常牛および野外材料とともに例数を増やし広範囲に検討予定である。また、以上の遅延により研究発表ができなく、それに伴う旅費の支出がなかった。
すべて 2019
すべて 雑誌論文 (6件) (うち国際共著 1件、 査読あり 6件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (5件) (うち国際学会 1件)
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