| 研究課題/領域番号 |
18K06934
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
鎌倉 幸子 九州大学, 医学研究院, 講師 (80398081)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 細胞極性 / 上皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
脊椎動物の体は６割以上が上皮細胞で構成され、この細胞が作る圧倒的な面積のシートが体内と体外の環境を隔て、脊椎動物の生命を支えている。上皮細胞は、外界に接するapical膜と体内側に接するbasolateral 膜という 性質の異なる細胞膜ドメインを持ち、機能的にも形態的にも細胞極性を持つ。この２つの膜ドメインを分かつのが タイトジャンクション (tight junction: TJ) であり、TJの形成には、細胞極性の制御に関わる蛋白質複合体「Par-aPKC複合体」(aPKC: atypical protein kinase C) が必要であることがよく知られている。しかしながら、この3者複合体がTJ形成を促進する際の機序については不明な点が多い。申請者は最近、Par-aPKC 複合体に結合する膜貫通型タンパク質 ParTR1を同定し、TJ形成の強力な負の調節因子であることを見出した。本研究は、この新規TJ調節因子ParTR1に対するPar-aPKC 複合体の作用機序、細胞及び個体レベルでのParTR1の機能の解析を軸に、Par-aPKC 複合体によるTJ形成の制御メカニズムを解明する。これまでの実験から、ParTR1とClaudin-1タンパク質が結合することを見出していたが、本年度は、この結合に関わるParTR1のタンパク質領域を明らかにした。また、ParTR1がclaudin-1に加えclaudin-2にも結合することを見出し、Claudin-1及びclaudin-2の各々のホモオリゴマー形成をParTR1が抑制すること等を示した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
申請書の実験計画通りに、順調に研究を進めることができているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
MDCK細胞において 内在性のParTR1がTJに局在することを見出している。ParTR1が機能を発揮するためにもTJへの局在の制御は重要と考えられるが、その機構は未だ不明である。そこで、ParTR1のTJへの局在に必要な領域を同定する。また、ParTR1がPar3やClaudin1などのTJタンパク質と結合することから、これらのタンパク質によりリクルートされる可能性を検討する。Par3 および Claudin1について、CRISPR-Cas9による遺伝子欠失や、siRNAを用いたノックダウンを行い、ParTR1のTJへの局在に対する影響を細胞染色により解析する。
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