| 研究課題/領域番号 |
18K06934
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
鎌倉 幸子 九州大学, 医学研究院, 講師 (80398081)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 上皮細胞 / 細胞極性 |
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| 研究実績の概要 |
脊椎動物の体は６割以上が上皮細胞で構成され、この細胞が作る圧倒的な面積のシートが体内と体外の環境を隔て、脊椎動物の生命を支えている。上皮細胞は、外界に接するapical膜と体内側に接するbasolateral 膜という 性質の異なる細胞膜ドメインを持ち、機能的にも形態的にも細胞極性を持つ。この２つの膜ドメインを分かつのが タイトジャンクション (tight junction: TJ) であり、TJの形成には、細胞極性の制御に関わる蛋白質複合体「Par-aPKC複合体」(aPKC: atypical protein kinase C) が必要であることがよく知られている。しかしながら、この3者複合体がTJ形成を促進する際の機序については不明な点が多い。申請者は最近、Par-aPKC 複合体に結合する膜貫通型タンパク質 ParTR1を同定し、TJ形成の強力な負の調節因子であることを見出した。本研究は、この新規TJ調節因子ParTR1に対するPar-aPKC複合体の作用機序、細胞及び個体レベルでのParTR1の機能の解析を軸に、Par-aPKC複合体によるTJ形成の制御メカニズムを解明する。これまでの実験から、ParTR1とClaudin-1タンパク質が結合することを見出していたが、本年度は、この結合に関わるTMEM25側のタンパク質領域を明らかにした。また、ParTR1がClaudin-1及びclaudin-2の各々のcis 結合をParTR1が抑制すること等を見出していたが、さらにtrans 結合についても抑制すること等を明らかにした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画通りに研究が進捗しているため
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| 今後の研究の推進方策 |
ParTR1の結合蛋白質の探索：ParTR1によるClaudin1のオリゴマー化の抑制が ParTR1に結合する他の蛋白質に依存する可能性、あるいはParTR1の局在や活性が他の蛋白質によって制御される可能性を考え、新規ParTR1の結合タンパク質をMass Spectrometryを用いて探索する。FLAGタグを付加したParTR1をHEK293T細胞（ヒト胎児腎臓由来の細胞株）に過剰発現し免疫沈降する。共沈したタンパク質をMass spectrometryにより解析し、結合タンパク質の候補を明らかにする。またParTR1とClaudin1との結合をPar3が抑制する際のメカニズムについても解析を行う。
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