• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2018 年度 実施状況報告書

癌におけるRAS発現量依存的な生存シグナルの解析

研究課題

研究課題/領域番号 18K06953
研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

倉田 盛人  東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 講師 (40451926)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワードがん遺伝子 / NRAS / CRISPR library
研究実績の概要

RASは多くの癌種において増殖に関与する癌遺伝子と広く知られている。シグナリングに関しても非常に多くの研究がなされており、これまでの報告からRASシグナルは増殖だけでなく、細胞老化など非常に複雑な多様性が報告されている。また、既存の下流分子の阻害剤のみでは癌抑制には至らないことも知られており、シグナリング全貌の把握が今後の癌研究に必要であると考えている。申請者はこれまでに、内因性のNRASをCRISPRでノックアウトしつつ、テトラサイクリン(ドキシサイクリン)誘導型ベクターでNRASの発現を調整できる細胞の樹立を行ってきた。ドキシサイクリンによってNRASの発現量を調節することによって、シグナルの多様性を再現することが可能である。この系を用いてNRASシグナルの網羅的な解析を遂行中である。
1.CRISPR libraryを用いた解析:ランダムな変異を誘導するCRISPR knockout libraryを用いて、NRAS発現量依存的シグナルの解明を行った。当該年度は、ドキシサイクリンを取り除いた細胞周期が停止する状態に対して、CRISPR libraryで細胞増殖が保たれるクローンの誘導を試みた。6×10<sup>6</sup>の細胞から12クローンの樹立に成功した。組み込まれているガイドRNAを解析し、候補遺伝子が得られた。
2.次世代シークエンサーを用いた解析:ドキシサイクリン濃度が過剰状態(=NRASの発現が高い状態)において、細胞老化が観察された。ドキシサイクリン濃度依存的に発現量の異なる遺伝子68個を同定した。そのうち49遺伝子は、NRASの発現量依存的に発現が亢進したにも関わらず、過剰発現にて再度発現量の減少が見られる奇怪な挙動が見られた。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初の研究計画通りに進んでいる。CRISPR libraryと次世代シークエンサーを用いた解析に着手でき、今後さらなる検証は必要なものの、候補分子が得られた。

今後の研究の推進方策

引き続きNRASシグナルの網羅的な解析を行う。CRISPR libraryを用いた解析では、ランダムに遺伝子の活性化を行うActivation libraryのscreeningも行う予定である。また、NRASが高発現の状態において、細胞老化をキャンセルできるクローンの樹立を試みる。
また、得られた候補遺伝子に関してはスクリーニングと同様の表現型が得られるか検証を行う。
次世代シークエンサーの解析より得られた候補遺伝子においても、シグナル内における働きを検証する。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2018

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Highly multiplexed genome engineering using CRISPR/Cas9 gRNA arrays2018

    • 著者名/発表者名
      Kurata Morito、Wolf Natalie K.、Lahr Walker S.、Weg Madison T.、Kluesner Mitchell G.、Lee Samantha、Hui Kai、Shiraiwa Masano、Webber Beau R.、Moriarity Branden S.
    • 雑誌名

      PLOS ONE

      巻: 13 ページ: -

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0198714

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] NRAS発現調整可能細胞株を用いたシグナリングの解析2018

    • 著者名/発表者名
      倉田盛人, 山本浩平, Noble-Orcutt Klara, 山本阿紀子, Sachs Zohar, David Largaespada, 北川昌伸
    • 学会等名
      第107回日本病理学会総会
  • [学会発表] NRAS発現調整可能システムとシグナルの解析2018

    • 著者名/発表者名
      倉田盛人, 山本浩平, 北川昌伸, Noble-Orcutt Klara、Susan K. Rathe, Alexandra Hilles heim, Zain Qarni, Zohar Sachs, David La rgaespada
    • 学会等名
      第77回日本癌学会学術総会

URL: 

公開日: 2019-12-27  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi