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2019 年度 実施状況報告書

食道扁平上皮癌の発癌初期段階におけるマクロファージ・線維芽細胞の協調作用の解析

研究課題

研究課題/領域番号 18K07015
研究機関神戸大学

研究代表者

狛 雄一朗  神戸大学, 医学研究科, 講師 (40714647)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワード食道扁平上皮癌 / がん関連線維芽細胞 / マクロファージ
研究実績の概要

食道扁平上皮癌の発癌初期段階におけるがん関連線維芽細胞(cancer-associated fibrobast, CAF)の役割を検討するために、ヒト食道正常扁平上皮細胞株(Het-1A)と線維芽細胞との間接共培養系を確立した。線維芽細胞として、CAFの起源と考えられているヒト骨髄由来間葉系幹細胞(mesenchymal stem cell, MSC)とヒト食道由来線維芽細胞(esophageal fibroblast, fibroblast)を用いた。
前年度に間接共培養の期間の最適な条件を検討し、Het-1Aと4日間の間接共培養を施行したMSCとfibroblastのいずれにおいてもCAFマーカーであるfibroblast activation protein (FAP)とpodoplaninの発現が充分に亢進することを確認できた。以上から間接共培養の期間は4日間に固定した。
「間接共培養後のMSCあるいはfibroblast」は「単独培養後のMSCあるいはfibroblast」と比べて増殖能と運動能が亢進し、細胞内シグナル伝達においてはSTAT3のリン酸化レベルが亢進していた。さらには「間接共培養後のMSCあるいはfibroblast」と「単独培養後のMSCあるいはfibroblast」との間でサイトカインアレイ解析やcDNAマイクロアレイ解析を施行し、後者において分泌量や発現量の亢進する分子を網羅的に抽出した。これらの分子の発現量の変化を定量的PCR、ELISA、western blotによって確認した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

「単独培養後のMSCあるいはfibroblast」と「間接共培養後のMSCあるいはfibroblast」から培養上清を回収し、サイトカインアレイ解析を施行したところIGFBP2とIGFBP3のスポットが亢進していた。この結果を定量的PCRとELISAで検討し、IGFBP2はmRNAおよび分泌タンパク質のいずれにおいても発現・分泌が有意に亢進していることを見出した。
「単独培養後のMSCあるいはfibroblast」と「間接共培養後のMSCあるいはfibroblast」からmRNAを回収し、cDNAマイクロアレイ解析を施行した。MSCの実験系とfibroblastの実験系に共通して発現量が亢進している遺伝子に着目し、定量的PCRではCCL2、DHRS3、ANXA10、latexin、keratin 18、PAI2のmRNAレベルでの発現の亢進を確認できた。さらにはwestern blotあるいはELISAではCCL2、ANXA10、PAI2のタンパク質レベルでの発現・分泌の亢進を確認できた。

今後の研究の推進方策

Het-1Aと間接共培養したMSCあるいはfibroblastでは、CAFマーカーの発現亢進に加えて増殖能・運動能の亢進ならびにSTAT3の活性化を確認できた。また、この時に細胞外への分泌が亢進する分子としてIGFBP2、CCL2、PAI2を、細胞内で発現の亢進する分子としてANXA10を見出した。
分泌の亢進する分子(IGFBP2、CCL2、PAI2)についてはこれらのリコンビナントタンパク質をMSCあるいはfibroblastに添加した際の増殖能や運動能への影響を検討する。また、発現の亢進する分子(ANXA10)についてはsiRNAによってMSCあるいはfibroblastで発現を抑制した際の増殖能や運動能への影響を検討する。

次年度使用額が生じた理由

前年度に網羅的解析によって見出した分子の機能解析をする予定であったが、候補分子が複数あり、解析分子を絞り込む段階で時間を要したため、機能解析を実施できなかった。今年度に個々の分子の機能解析を実施する予定である。

  • 研究成果

    (30件)

すべて 2020 2019 その他

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (28件) (うち招待講演 2件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Growth Differentiation Factor 15 Promotes Progression of Esophageal Squamous Cell Carcinoma via TGF-β Type II Receptor Activation2020

    • 著者名/発表者名
      Maiko Okamoto, Yu-ichiro Koma, Takayuki Kodama, Mari Nishio, Manabu Shigeoka, Hiroshi Yokozaki
    • 雑誌名

      Pathobiology

      巻: 87 ページ: 100-113

    • DOI

      10.1159/000504394. Epub 2020 Jan 2.

    • 査読あり
  • [学会発表] 食道がんの進展におけるがん-間質相互作用の役割2019

    • 著者名/発表者名
      狛 雄一朗, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
    • 招待講演
  • [学会発表] CD163陽性マクロファージに着目した舌白板症の病理組織学的評価2019

    • 著者名/発表者名
      重岡 学, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 癌関連線維芽細胞はPAI-1の分泌を介して食道扁平上皮癌の進展に寄与する2019

    • 著者名/発表者名
      坂本 浩輝, 東野 展英, 児玉 貴之, 藤川 正隆, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージとの共培養により食道扁平上皮癌細胞で発現低下するマイクロRNAの解析2019

    • 著者名/発表者名
      藤川 正隆, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 東野 展英, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 心筋炎を発症した心筋組織に浸潤するマクロファージの免疫組織化学的評価2019

    • 著者名/発表者名
      中嶋 七海, 西尾 真理, 吉田 誠, 上原 慶一郎, 田中 秀和, 児玉 貴之, 小平 日実子, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌組織免疫染色画像のマクロファージ形態計測と疑似蛍光カラー化画像解析2019

    • 著者名/発表者名
      山川 惇之介, 西尾 真理, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 小平 日実子, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌の進展における癌細胞と腫瘍関連マクロファージの直接接着による細胞間相互作用の解析2019

    • 著者名/発表者名
      塚本 修一, 狛 雄一朗, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージに誘導されるANXA10は食道扁平上皮癌の増殖を促進する2019

    • 著者名/発表者名
      小平 日実子, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージ由来のCCL3はAktおよびERK経路を介して食道扁平上皮癌の運動能を亢進する2019

    • 著者名/発表者名
      児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第108回日本病理学会総会
  • [学会発表] 生検標本における上皮内CD163陽性マクロファージは舌白板症の鑑別診断に有用である2019

    • 著者名/発表者名
      重岡 学, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 小平 日美子, 市原 有美, 西尾 真理, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第38回分子病理学研究会
  • [学会発表] 舌白板症においてCD163陽性マクロファージはIL-10の発現を誘導する2019

    • 著者名/発表者名
      重岡 学, 藤田 知樹, 谷川航平, 清水将来, 児玉貴之, 坂本浩輝, 藤川正隆, 小平日美子, 市原有美, 西尾真理, 狛雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第38回分子病理学研究会
  • [学会発表] 癌関連線維芽細胞はPAI-1の分泌を介して食道扁平上皮癌の進展に寄与する2019

    • 著者名/発表者名
      坂本 浩輝, 東野 展英, 児玉 貴之, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌の進展における癌細胞と腫瘍関連マクロファージの直接接着による細胞間相互作用の解析2019

    • 著者名/発表者名
      塚本 修一, 狛 雄一朗, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 東野 展英, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 口腔癌の発癌初期段階におけるCD163陽性マクロファージの意義2019

    • 著者名/発表者名
      重岡 学, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日美子, 西尾 真理, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージとの共培養により食道扁平上皮癌細胞で発現低下するmiR-132-5pの解析2019

    • 著者名/発表者名
      藤川 正隆, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 東野 展英, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージはCCL3-CCR5系を介して食道扁平上皮癌の遊走能と浸潤能を亢進する2019

    • 著者名/発表者名
      児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 東野 展英, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌微小環境におけるFAP陽性癌関連線維芽細胞の役割2019

    • 著者名/発表者名
      狛 雄一朗, 東野 展英, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第28回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージはCCL3-CCR5系を介して食道扁平上皮癌の進展に寄与する2019

    • 著者名/発表者名
      児玉 貴之, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第16回日本病理学会カンファレンス
  • [学会発表] 癌関連線維芽細胞はPAI-1の分泌を介して食道扁平上皮癌の進展に寄与する2019

    • 著者名/発表者名
      坂本 浩輝, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 児玉 貴之, 藤川 正隆, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第39回日本分子腫瘍マーカー研究会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージとの共培養により食道扁平上皮癌細胞で発現低下するmiR-132-5pの解析2019

    • 著者名/発表者名
      藤川 正隆, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージはCCL3-CCR5系を介して食道扁平上皮癌の遊走能と浸潤能を亢進する2019

    • 著者名/発表者名
      児玉 貴之, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌と腫瘍関連マクロファージとの相互作用は癌進展に関与する2019

    • 著者名/発表者名
      狛 雄一朗, 藤田 知樹, 児玉 貴之, 谷川 航平, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌の進展における癌細胞と腫瘍関連マクロファージの直接接触による細胞間相互作用の解析2019

    • 著者名/発表者名
      谷川 航平, 藤田 知樹, 児玉 貴之, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 小平 日実子, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 癌関連線維芽細胞はPAI-1の分泌を介して食道扁平上皮癌の進展に寄与する2019

    • 著者名/発表者名
      坂本 浩輝, 藤田 知樹, 谷川 航平, 清水 将来, 児玉 貴之, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌微小環境における癌関連線維芽細胞で高発現する遺伝子群の解析2019

    • 著者名/発表者名
      清水 将来, 藤田 知樹, 谷川 航平, 児玉 貴之, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 生検標本における上皮内CD163陽性マクロファージは舌白板症の鑑別診断に有用である2019

    • 著者名/発表者名
      重岡 学, 藤田 知樹, 谷川 航平, 児玉 貴之, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第78回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 腫瘍関連マクロファージとの共培養により食道扁平上皮癌細胞で発現低下するmiR-132-5pの解析2019

    • 著者名/発表者名
      藤川 正隆, 藤田 知樹, 児玉 貴之, 清水 将来, 谷川 航平, 坂本 浩輝, 市原 有美, 小平 日実子, 西尾 真理, 重岡 学, 狛 雄一朗, 横崎 宏
    • 学会等名
      第30回日本消化器癌発生学会総会
  • [学会発表] 食道扁平上皮癌と腫瘍関連マクロファージの相互作用は癌進展に関与する2019

    • 著者名/発表者名
      狛 雄一朗, 小平 日実子, 藤田 知樹, 児玉 貴之, 谷川 航平, 清水 将来, 坂本 浩輝, 藤川 正隆, 市原 有美, 西尾 真理, 重岡 学, 横崎 宏
    • 学会等名
      第30回日本消化器癌発生学会総会
    • 招待講演
  • [備考] 神戸大学大学院医学研究科 病理学講座病理学分野

    • URL

      https://www.med.kobe-u.ac.jp/patho/index.html

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公開日: 2021-01-27  

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