| 研究課題/領域番号 |
18K07039
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| 研究機関 | 琉球大学 |
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研究代表者 |
市瀬 多恵子 琉球大学, 医学部, 委託非常勤講師 (00396863)
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| 研究分担者 |
市瀬 広武 琉球大学, 医学部, 准教授 (10313090)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | CBP/p300 / 皮膚 / ケラチノサイト |
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| 研究実績の概要 |
EGFRは上皮性腫瘍の癌化に深く寄与しており、EGFRを標的としたキナーゼ活性の抑制による治療法が開発されている。しかし、EGFRは上皮組織の恒常性維持やバリア機能にも寄与しており、EGFRのキナーゼ活性の抑制は重篤な副作用を引き起こす。
本研究では、CBP/p300依存性のアセチル化レベルを、インヒビターやアクチベーターを用いて変化させることで、EGFRシグナリングを遮断することなく、EGFRシグナリングの強度を人為的かつ適切に制御する方法について検討する。本研究の発展により、皮膚の恒常性を維持する方法、さらに、皮膚扁平上皮癌を抑制する方法の確立を目指している。
2019年度は、以下の成果を得た。CBP/p300には表皮ケラチノサイトにおけるEGFR-Ras- Erkシグナリングの活性化を負に制御する作用があること、そしてその制御の破綻が表皮ケラチノサイトのがん化を促進していることを明らかにし、論文としてまとめ、公表した。CBP/p300の発現量減少は、Mig6の発現量減少、EGFRのリン酸化レベルの亢進、Ras-Raf1-Mek1/2-Erk1/2シグナリングの亢進を引き起こす。CBP/p300の酵素活性を抑制するCBP/p300インヒビター、あるいはCBP/p300依存性のアセチル化修飾を亢進する効果を有するヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)インヒビターの存在下で、マウス表皮ケラチノサイト、ヒト初代培養ケラチノサイト、ヒト上皮癌細胞株などを培養した場合に、EGFRシグナリング促進もしくは抑制効果があるかを検討した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
2018年度より所属大学が変更となったため、遺伝子改変マウスを凍結胚を融解して飼育・生産する必要があり、当初の計画よりマウスを用いた実験が遅れてしまった。しかし、細胞を用いた分子レベルでの解析を進め、論文を投稿することができたので、おおむね順調に進展しているといえる。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初、K15-CrePRマウスを用いて、CBP/p300の遺伝子組換えを誘導しようと計画していたが、K15-CrePRによる遺伝子組換え効率が悪く、CBP/p300の発現減少が確認できなかった。現在、他のリガンド誘導型CreマウスをCBP/p300コンディショナルノックアウトマウスと交配し、生産中である。使用する遺伝子改変マウスの準備が整い次第、マウスを用いた解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2018年度より所属大学が変更となったため、凍結胚の個体化を介して遺伝子改変マウスの飼育や生産を行う必要があり、当初の計画よりマウスを用いた実験が遅れてしまった。そのため、マウス代・飼育費、細胞培養用試薬・抗体などの購入費が一部未使用となってしまった。現在、実験に使用するマウスの生産中であるが、準備が整い次第、in vivoでの解析を進める予定であり、昨年度に未使用であった予算が必要となる。また、2019年度に予定していたRNA-seqによる網羅的解析も2020年度に行う予定であり、その予算が必要になる。
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