| 研究課題/領域番号 |
18K07070
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
松浦 恵子 大分大学, 医学部, 教授 (00291542)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 腎癌 / ノックアウトマウス / Hippoパスウェイ |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ccRCCの発症と悪性化を忠実に模倣するモデルを作製する目的で、腎臓だけで癌抑制遺伝子VHLとSAV1の遺伝子がダブルにノックアウトされるマウスを作成する。さらに遺伝子欠失の時期が生後数週間たってから起きる誘導性のノックアウトマウスとする。癌の進行・進展の過程を忠実に再現できるモデルマウスの作製により、腎癌の発生から悪性化に至るメカニズムを解明するだけでなく、Hippoパスウェイをターゲットとした治療の有効性を証明することにより、真に予後不良な高悪性度腎癌の治療標的を明確し、モデルマウスを用いた治療法の評価系を構築することを目指す。
2018年度は、VHL単独、SAV1単独、VHLとSAV1のダブルノックアウトマウスを作成した。ホモノックアウトマウスは出生しないか、出生後すぐに死亡した。死亡したマウスの腎臓には嚢胞が散見された。
2019年度には、2018年度に作成したノックアウトマウスについて、腎臓の組織学的変化や免疫組織学的解析を行った。ホモノックアウトマウスでは、嚢胞内に異形な細胞の増生がみとめられた。ヘテロノックアウトマウスを長期にわたって観察したところ、生存率には違いがみられなかったが、腎重量の違いがみられた。またSAV1/VHLダブルノックアウトマウスについてCre発現を誘導する系を新たに立ち上げた。
2020年度には、ホモノックアウトマウスについてSAV1, VHL, SAV1+VHLでの遺伝子欠失の組み合わせによって腎発生や嚢胞のでき方について解析した。特にSAV1に着目し、腎の正常発生に異常がみられること、発生初期にはSAV1のヘテロノックアウトマウスでも異常がみられることを明らかにした。血清を採取し、腎機能や体重を測定した。また新たな誘導性のCre発現系マウスを作成した。生後6－7週の段階でtamoxyfenを腹腔内投与5日間し、経過観察中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
2019年度にはホモノックアウトマウスおよびヘテロノックアウトマウスでのYAP1を中心とした免疫組織化学的解析を行ったが、2020年度にはそれらのマウスのYAP1以外の発現状態を免疫組織化学的に解析した。また新たな誘導系のマウスの系統を確立することができた。6か月、1年というスパンでの表現型の観察を行う予定としている。
以上より概ね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
ホモノックアウトマウスについてSAV1, VHL, SAV1+VHLでの遺伝子欠失の組み合わせによって腎発生や嚢胞のでき方について免疫染色を加えて解析する。また体重、腎重量や腎機能について、統計学的に解析し比較する。
新たな誘導性のCre発現系マウスは生後6－7週の段階でtamoxyfenを腹腔内投与5日間し、生後6か月、1年間等で全身の臓器の変化を観察する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2020年度には、大学動物舎の改築等の関係上、ノックアウトマウスの繁殖数が制限され、PCR,、マウス等物品費に係る予算が当初計画より少なかった。また新型コロナウイルス感染症により学会発表がオンラインとなり旅費が発生しなかった。2021年度にはマウスの解析をさらにすすめるため、物品費は使用できる。また、学会等で結果の報告や資料収集のための旅費も2021年度に使用できる予定である。
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