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2020 年度 実績報告書

新規な遺伝子操作系を用いたロタウイルス増殖および病原性発現の機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 18K07150
研究機関藤田医科大学

研究代表者

河本 聡志  藤田医科大学, 医学部, 准教授 (60367711)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワードロタウイルス / リバースジェネティクス / 11-プラスミドシステム / 腸管指向性ウイルスベクター
研究実績の概要

任意のロタウイルスを人工合成することは、ウイルスの感染増殖や病原性発現のメカニズムの解明といった基礎研究のみならず、安全性に優れた次世代ワクチンや腸管指向性ウイルスベクターの開発にも繋がる。私たちは最近、ロタウイルスゲノムをコードするプラスミドのみから、簡便にしかもきわめて効率良く動物(サル)ロタウイルスを人工合成する技術(J Virol 92, 2018)に引き続き、増殖能がきわめて低いヒトロタウイルスを人工合成できる技術の開発にも、世界に先駆けて成功している(J Virol 93, 2019)(11-プラスミドシステム)。
今年度の研究成果として、11-プラスミドシステムを用いて、複数の外来遺伝子の同時発現を可能とする組換えロタウイルスの作製に成功した(J Gen Virol 102, 2021)。はじめに、これまでに報告のない大きなサイズの外来遺伝子のロタウイルスゲノムへの挿入を可能とするため、セグメント5(NSP1をコード)の大部分を欠失させて(両末端222塩基のみの構造)、代わりにNanoLuc luciferase(Nluc)遺伝子を挿入した組換えロタウイルスの作製を試みた。作製した感染性ウイルスは感染細胞で安定にNlucを発現しており、このセグメント5のプラットフォームはロタウイルス複製にとって十分であることが示された。次に、Nluc-EGFP-mCherryという、3つのレポーター遺伝子をブタテスコウイルスの2Aペプチド配列で繋げた構造の外来遺伝子をセグメント5に挿入させた組換えロタウイルスの作製にも成功した。この感染性ウイルスは感染細胞で安定にNluc、EGFP、mCherryという3つものレポーター遺伝子を同時発現しており、ロタウイルスゲノムから複数の完全長の外来遺伝子を同時発現させることが可能であることを示した。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2021 2020

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件)

  • [雑誌論文] Strategy for generation of replication-competent recombinant rotaviruses expressing multiple foreign genes2021

    • 著者名/発表者名
      Hatazawa R, Fukuda S, Kumamoto K, Matsushita F, Nagao S, Murata T, Taniguchi K, Matsui T, Komoto S.
    • 雑誌名

      J Gen Virol

      巻: 102 ページ: -

    • DOI

      10.1099/jgv.0.001587

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Rapid generation of rotavirus single-gene reassortants by means of eleven plasmid-only based reverse genetics2020

    • 著者名/発表者名
      Fukuda S, Hatazawa R, Kawamura Y, Yoshikawa T, Murata T, Taniguchi K, Komoto S.
    • 雑誌名

      J Gen Virol

      巻: 101 ページ: 806-815

    • DOI

      10.1099/jgv.0.001443

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Generation of recombinant rotaviruses from just 11 cDNAs encoding a viral genome2020

    • 著者名/発表者名
      Komoto S, Fukuda S, Hatazawa R, Murata T, Taniguchi K.
    • 雑誌名

      Virus Res

      巻: 286 ページ: 198075

    • DOI

      10.1016/j.virusres.2020.198075

    • 査読あり

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公開日: 2021-12-27  

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