HBV感染・複製に関与する長鎖非コードRNAの同定とその機能評価

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18K07161
• 研究機関: 藤田医科大学
• 研究代表者: 西辻 裕紀 藤田医科大学, 医学部, 講師 (20573661)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: HBV / lncRNA

研究実績の概要

本研究では、HBV複製に関係するlncRNAの同定を試みた。
HBV Xタンパク質と結合するlncRNAを同定するため、HAとmycタグを付加したXタンパク質をHepG2細胞に発現させ、HA抗体、myc抗体で免疫沈降を行い、X遺伝子と結合するlncRNAを次世代シークエンスで同定した。その結果、一つのmiRNAがX遺伝子と強く結合した。
このmiRNAがX遺伝子の機能に影響するかどうかを評価するため、このmiRNAに対するmimic及びinhibitorを用いて、その機能評価を行った。その結果、mimic処理を行った細胞では、Xタンパク質のHBV coreプロモーターの転写活性化能が抑制された。一方、inhibitorを処理した細胞では、Xタンパク質のHBV coreプロモーターの転写活性化能が促進された。以上の結果より、今回同定したmiRNAはHBV Xタンパク質を抑制することが示唆された。次に、HBV感染におけるmiRNAの機能を評価した。その結果、mimic処理を行った細胞では、HBVの感染が抑制された。一方、inhibitorを処理した細胞では、HBVの感染が促進された。この結果より、今回同定したmiRNAはHBV感染も抑制することが示唆された。今回同定したmiRNAの作用機序を検討するために、mimicまたはinhibitorを用いて、Xタンパク質の発現を評価した。その結果、mimic処理した細胞ではXタンパク質の量が減少し、inhibitorを処理した細胞では、Xタンパク質の量が増加した。その結果、今回同定したmiRNAはXタンパク質の安定に関与することが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] N-Terminal PreS1 Sequence Regulates Efficient Infection of Cell-Culture-Generated Hepatitis B Virus. (2021)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Yamada N, Osaki Y, Shiina M, Aly HH, Iwamoto M, Tsukuda S, Watashi K, Matsuda M, Suzuki R, Tanaka T, Moriishi K, Suzuki T, Nishitsuji H, Sugiyama M, Mizokami M, Shimotohno K, Wakita T, Muramatsu M, Liang TJ, Kato T.
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 73 ページ: 520-532
  • DOI: 10.1002/hep.31308
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of Two Critical Neutralizing Epitopes in the Receptor Binding Domain of Hepatitis B Virus preS1 (2020)
  • 著者名/発表者名: Yato K, Onodera T, Matsuda M, Moriyama S, Fujimoto A, Watashi K, Aizaki H, Tanaka T, Moriishi K, Nishitsuji H, Shimotohno K, Tamura K, Takahashi Y, Wakita T, Muramatsu M, Kato T, Suzuki R.
  • 雑誌名: Journal of virology 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1128/JVI.01680-20.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Modulation of hepatitis B virus infection by epidermal growth factor secreted from liver sinusoidal endothelial cells. (2020)
  • 著者名/発表者名: Chen SW, Himeno M, Koui Y, Sugiyama M, Nishitsuji H, Mizokami M, Shimotohno K, Miyajima A, Kido T.
  • 雑誌名: Scientific reports 巻: 10 ページ: -
  • DOI: 10.1038/s41598-020-71453-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Orchestration of Intracellular Circuits by G Protein-Coupled Receptor 39 for Hepatitis B Virus Proliferation. (2020)
  • 著者名/発表者名: Goto K, Nishitsuji H, Sugiyama M, Nishida N, Mizokami M, Shimotohno K.
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 21 ページ: -
  • DOI: 10.3390/ijms21165661.
  • 査読あり / オープンアクセス