| 研究課題/領域番号 |
18K07285
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
太田 里永子 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (30452460)
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| 研究分担者 |
葛島 清隆 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫応答研究分野, 分野長 (30311442) [辞退]
今井 優樹 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (30440936)
岡村 文子 (出町文子) 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫制御TR分野, 主任研究員 (10546948)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | T細胞受容体 / 親和性の成熟 / がん特異的TCR |
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| 研究実績の概要 |
TCR（T細胞受容体）の親和性の成熟をin vitroで行う方法として、ファージディスプレイ法があるが、もともとTCRは抗体に比べて、抗原との親和性が低く、そのため、抗原へのきわめて高精度な特異性があっても、一価での親和性が低いTCRでは、ファージディスプレイ法による親和性の成熟は困難であった。
そこで、ファージディスプレイ法に代わる新たな親和性の成熟方法として、「293T細胞ディスプレイ法」を考案した。
がん抗原hTERTに対する野生型のTCRα鎖とβ鎖の抗原認識部位（相補性決定領域、CDR）に、最大５個のアミノ酸にランダムに変異を導入した。αについては７個、βについては９個のライブラリーを作成した。ライブラリーサイズは、理論的なDNAの多様性に匹敵するTCR遺伝子ライブラリーが得られた。
これらのライブラリーを、293T-CD3細胞に遺伝子導入し、MHCテトラマー試薬で検出したところ、MHCコントロールテトラマー試薬と比較して、数パーセントだが、強く染色されるものがβ鎖のCDR1とCDR2のライブラリーに検出された。このことから、このTCRでは、β鎖のCDR1とCDR2に、抗原とのアフィニティを決定する部分があることが示唆された。
次に、MHCテトラマー試薬に強く染色される細胞群を、セルソーターを用いて分取し、クローニングを行い、反応性のよいクローンを複数個得た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
高親和性のTCR受容体を取得するために、この実験で鍵となるは、良質なTCR遺伝子ライブラリーの構築である。今年度は、ライブラリーの構築方法について様々な改良を試みて、ライブラリーサイズが理論値に匹敵する大きさのライブラリーを構築することができた。
また、TCRを大腸菌リコンビナントタンパク質として作成する準備を行い、野生型のTCRについて、たんぱく質の発現とMHCに対する反応性を確認できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
得られたクローンについて、遺伝子解析を行い、高親和性のTCRの遺伝子配列にどうのような傾向がみられるか検討する。得られたクローンのTCRを大腸菌のリコンビナントタンパク質として作成し、抗原との結合力をBiacoreにて評価する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
計画していた一部の実験が行えず、試薬を購入しなかったため。
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