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抗PD-1抗体などの免疫チェックポイント分子を標的にするアプローチに加え 、免疫応答を負に制御する 制御性T細胞（regulatory T cell: Treg）の抑制を解除することで、がんに対する免疫応答を強化する新たな治療法の開発が注目されている 。しかし、がん組織内でTregがどのような抗原を認識し、抗原特異的にがん免疫応答を抑制しているかに関しては、いまだ不明な点が多い。そこで 、本研究では独自に開発した単一T細胞解析技術を用いて、がん組織内でクローナルに集積するTregのT細胞受容体（TCR）の網羅的な解析を行い、それらTregの抗原を同定する。さらに、同定した抗原を用いて、Tregが抗原特異的にがん免疫応答を抑制しているか否かを検証する。
本年度はB16F10細胞をC57BL/6マウスに移入して、担がんマウスを作製した。その後、腫瘍浸潤リンパ球を調整し、CD25等の分子をマーカーにCD4+T細胞の単一細胞ソーティングを行い、TCRのレパトア解析を行った。その結果、複数のクローナルに増殖したTCRが観察された。また、取得したTCRの発現ベクターを作製し、マウス脾臓由来T細胞に発現させた。同時に、取得したCD4陽性T細胞のTCRの抗原特異性を評価するために、C57BL/6マウスの骨髄より樹状細胞（BMDC）を誘導する系を確立した。誘導したBMDCにOVAを取り込ませ、OVA特異的TCRを発現させたT細胞と共培養したところ、IFN-γの発現が確認された。また、取得したTCRを発現させたマウス脾臓細胞とIFN-γ処理することでH-2Kbの発現を増加させたB16F10細胞と共培養したところ、IFN-γの産生が確認された。
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