| 研究課題/領域番号 |
18K07493
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
金澤 雅人 新潟大学, 脳研究所, 講師 (80645101)
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| 研究分担者 |
下畑 享良 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60361911)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 末梢血単核球 / 脳梗塞 / 脳虚血 / 血管内皮増殖因子 / 血管新生 / 神経軸索進展 |
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| 研究実績の概要 |
脳虚血後，外因性単核球投与にて脳実質内に移行するか，局在を確認し，血管新生，シナプス形成を明らかにする目的で実験を実施した．
すでに確立した「ラット塞栓糸脳梗塞再還流モデル」と末梢血から分離した単核球を用いて，低酸素低糖（OGD)刺激有と刺激なしの細胞投与を行った．細胞投与は，脳虚血7日後に行った．慢性期の運動機能の解析として，３０度の角にラットを置き，どちらに回るかを評価するコーナーテスト(運動麻痺および視空間認知障害，感覚障害を反映する)で実施し，虚血前，虚血１日，３日，７日，１４日，２１日，２８日の機能を評価した．OGD刺激を加えた単核球細胞を投与した群では，無治療群，刺激なし単核球細胞投与群と比べて，脳虚血後3週間後，有意な機能改善を認めた．
投与単核球の局在を明らかにするためGFPマウス由来の初代細胞を準備し，細胞投与3日後，投与21日後に免疫染色サンプルを作成し，脳内の局在を共焦点レーザー顕微鏡で観察した．脳内脳梗塞周辺にGFP陽性細胞を認め，投与細胞は，脳内に移行していることが分かった．
細胞投与21日後（虚血28日後）に，血管新生マーカーCD31を用いて血管新生，軸索マーカーSMI31を用いて神経軸索の伸展を，共焦点レーザー顕微鏡にて評価し，3D解析ソフトIMARISで定量した．OGD刺激を加えた単核球細胞を投与した群では，無治療群，刺激なし単核球細胞投与群と比べて，細胞投与21日後（虚血28日後），有意に血管新生，神経軸索進展を認めた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
実験遂行が順調だったため．
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| 今後の研究の推進方策 |
予定通り，推進する．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
競争的外部獲得資金を獲得したため，科研費の一部は次年度に持越しした．平成31年度の計画では，試薬代を様々必要とする．繰り越した予算を用いて，十分な検討を進めたい．
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