| 研究課題/領域番号 |
18K07515
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
木村 卓 兵庫医科大学, 医学部, 准教授 (20441264)
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| 研究分担者 |
芳川 浩男 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (90273680) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 筋強直性ジストロフィー / スプライシング異常 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、筋強直性ジストロフィーI型（DM1）の中枢神経障害の機序を明らかにすることを目的とする。DM1ではDMPK遺伝子の異常なCTGリピート伸張とそれによる選択的スプライシングの異常が病因として知られている。研究代表者らは小脳では脳の他部位に比べてCTGリピート伸長、スプライシング異常の程度が小さいことを見出し、小脳ではCTGリピート伸長あるいはスプライシング異常を抑える因子が発現しているのではないかという仮説を立てた。本研究では、脳の各部位、各細胞層におけるスプライシングの程度及びその違いを生み出す要因について明らかにする。
ヒト剖検脳の各部位（前頭葉、側頭葉、海馬、小脳）のそれぞれの部位からRNAを抽出し、cDNAに逆転写した。スプライシング部位を増幅するためのプライマーを作成し、PCRで増幅し、電気泳動を行って、スプライシングアイソフォームの割合を算出した。多くの部位で本疾患患者脳からRNAはスプライシング異常を示したが、小脳では認められなかった。また前頭葉の皮質、白質からRNAを抽出し、同様の解析を行った。皮質、白質の分離については脳組織をスライスし、スライドグラスに貼り付け、スライドガラス上で切り分けた。分離が適切であるかどうかについては、白質の多く発現しているMOG、皮質に多く発現しているNEFHという遺伝子の発現量を定量的PCRでみることで確認した。その結果、白質ではスプライシング異常が起こりにくいことを見出した。
本症では、画像的には白質の変化が主体であるが、スプライシング異常は皮質で多くみられた。神経細胞体で起こっているスプライシング異常の結果として白質障害が起こっている可能性を想定している。成果を学術雑誌に投稿中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
上記のように、肉眼的および顕微鏡的病態多様性についての検討を計画通り進めているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
2020年度は新たに視床、被殻などの基底核でのスプライシング解析を行う。画像的な検索で、同部位では萎縮が認められる。また同部位の障害が、日中仮眠、認知機能障害の原因となっている可能性がある。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度は論文作成を優先したため、実験物品の消費が少なかった。来年度に実験を集中的に行い、実験に使用する消耗品の費用として用いる計画である。
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