| 研究課題/領域番号 |
18K07824
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
勝見 良樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (00808496)
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| 研究分担者 |
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266)
桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30590327)
菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (40453104)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 癌幹細胞 / ラブドイド腫瘍 / SMARCB1 |
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| 研究実績の概要 |
A. Sphere細胞：ラブドイド幹細胞として、ヒトラブドイド腫瘍細胞株であるKP-MRT-NS（NS）を幹細胞培養用培地で培養し、sphere形成された浮遊細胞のみを回収した。Sphere細胞は従来のNS細胞株とその発現についての差異をqPCRにおいて比較したところ、sphere細胞はSurvivin、FOXM1、CD44において有意差を認めた。
B. Hoechst33342：ラブドイド幹細胞として、ヒトラブドイド腫瘍細胞株であるG401にHoechst33342（HC）染色を行い、Sony Cell sorter SH800を用いてHC陽性細胞およびHC陰性細胞（＝幹細胞）を各々回収した。HC染色の妥当性はVerapamilによるABCG2抑制によってあわせて検証した。回収したHC陽性および陰性細胞を回収した幹細胞性の評価としてqPCRを用いて発現解析を行ったところ、Survivin、CD44においてsphere細胞にて検証した時と同様の結果を示した。一方、FOXM1においては逆の結果となった。
C. 増殖性：B実験において回収したHC陽性および陰性細胞を同細胞数で96wellに撒き増殖性について検証した。幹細胞であるHC陰性細胞はHC陰性細胞に比べ有意に増殖性を示した。
D. 造細胞性（マウスへの一次移植）：B実験において回収したHC陽性および陰性細胞を75-75000個で段階希釈してヌードマウスに移植した。初回および2回目の検証では陽性細胞・陰性細胞ともに造腫瘍性を認めなかったため、移植細胞数を増やしB実験からD実験への移行を速やかに行うなどを予定している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
マウスによる造腫瘍性実験において、いずれの群においても腫瘍発生がみられないため、条件設定を変更する必要があるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
造腫瘍性検証に関する検証をいったん中断し、Hoechst陰性および陽性細胞を検体として用いて網羅的発現解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
マウス実験において想定していた結果を得られず、一時的に次実験への進行が困難であった。
今後、研究の迅速な進行を促進するため、実験補助者を一時的に確保する予定である。
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