| 研究課題/領域番号 |
18K07845
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
粟野 宏之 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (30437470)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 筋ジストロフィー / カルパイン |
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| 研究実績の概要 |
神戸大学医学部附属病院に通院し、遺伝学的に診断されたDuchenne型筋ジストロフィー患者を4人、Becker型筋ジストロフィー患者を3人研究にリクルートした。対象の保管された凍結筋をからmRNAを抽出し、筋肉内のカルパイン関連遺伝子の発現について検討を行った。なお、コントロールとして購入した健常人の筋肉ｍRNAを用いた。検討するトランスクリプトはカルパイン1、２と、カルパインを阻害するカルパスタチン（CAST)であり、GAPDHを内部標準とした。発現の検討はサイバーグリーンを用いたリアルタイム-PCRのシステムで行った。
カルパイン１と２は配列の相同性が高いため、RT-PCRに用いるプライマーが特異的に標的トランスクリプトを増幅するかについて、RT-PCRと直接シークエンスで確認を行った。設計したプライマーがそれぞれの標的に特異的に結合することが確認できたため、患者検体を用いてリアルタイムPCRを行った。カルパイン1発現は、DMD患者の3/4、BMD患者の1/3で健常より亢進していた。カルパイン２の発現はDMDの全例、BMDの1/3で健常より亢進していた。CAST発現はDMDとBMDの全例で健常人と比較し抑制されていた。これらの結果から、DMDでは健常人に比較してカルパイン１，２の発現が亢進し、タンパク分解が促進されていることがわかった。BMDでは健常人よりカルパイン１，２発現が亢進している例があるが、DMDほどの頻度がないことが判明した。カルパイン活性を阻害するCAST発現はDMD、BMDの両者で全例、健常より低く、タンパク分解阻害機構が抑制されていることが判明した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
研究に使用する検体で、保存状態が良好でないものがあり、クオリティの高いmRNAの抽出が困難である場合がある。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、検体数を増やし同様の検討を行い、臨床データとも比較し、DMD/BMDの病態とカルパイン発現の関連を検討する。
次にカルパイン活性の測定が必要となるが、入手できる検体量が限られており、活性測定が困難であることが予想されるため、モデル動物での発現、活性の解析を予定している
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究に用いる試薬の納入検品が年度をまたいだため、年度内の試薬購入費を次年度に計上した。
購入ががすみ納入された試薬を次年度に使用する
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