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2018 年度 実施状況報告書

C型肝炎ウイルスによるミトコンドリア障害を回復する薬剤の探索

研究課題

研究課題/領域番号 18K07901
研究機関東京大学

研究代表者

堤 武也  東京大学, 医科学研究所, 准教授 (00726739)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワードHCVコア蛋白 / NanoBiTシステムによるスクリーニング / FDA認可薬剤化合物ライブラリー
研究実績の概要

まずNanoBiTシステムを用いたスクリーニングのために、Bnip3を発現する2種類のスクリーニング用プラスミドを作成した。これらのプラスミドを用いて、Bnip3の二量体形成促進する薬物を探索するため、C型肝炎ウイルス(HCV)のコア蛋白を発現するHepG2細胞を用いてスクリーニングを行なった。検討した化合物として、セレック社から販売されているFDA認可薬剤の化合物ライブラリー(全1566種類)を用いた。スクリーニングの結果、コントロール(化合物添加なし)に比べて活性を2倍以上増加させる化合物が44種同定された。その中で、5倍以上増強させるものが11種あった。5倍以上増強させる化合物のうち10種はHDAC阻害作用を有するものであり、これらは非特異的な活性増加、つまりHDAC阻害による転写活性増強によるものであることがわかった。それ以外の、2倍以上の増加を示した化合物34種について、in vitroにおけるBnip3の二量体形成の増強の有無をウエスタンブロット法にて検討したところ、いくつかの化合物が実際に二量体形成を促進することがわかった。これらの化合物が実際にin vitroにおいてmitophagyを回復するかについては、今後検討を行なっていく。
また並行して、将来的にin vivoでの効果を検討するために、HCVコア蛋白を発現するトランスジェニックマウス(HCVコア遺伝子トランスジェニックマウス)を所属施設で繁殖開始した。現在順調にマウスは生育しており、ある程度マウスの数が揃ったところで、in vitroで効果が認められた薬剤を投与し、表現系に与える影響を検討する予定である。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

今年度は、スクリーニング系の設計と、それを用いたFDA認可化合物ライブラリーのスクリーニングとそれによる候補化合物の選定を予定していたが、順調に実施することができた。可能であれば別のライブラリーのスクリーニングも実施したかったが、時間と費用の点から、次年度へ持ち越すこととした。FDA認可化合物ライブラリーから候補とされた化合物についてin vitroでの効果検討も行うことができ、実際に効果が認められたいくつかの化合物を同定することができた。

今後の研究の推進方策

引き続き、FDA認可化合物ライブラリーから同定された候補化合物についてin vitroでの効果を検証する。また別の化合物ライブラリーである天然化合物ライブラリーのスクリーニングも行い、さらなる候補化合物の同定を行う。これらの化合物ライブラリーにおいて候補として選定され、in vitroで効果が実証された化合物においては、HCVコア遺伝子トランスジェニックマウスに投与を行い、肝脂肪化や肝発がんなどの病態を予防・改善できるかを検討する。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2018

すべて 学会発表 (1件)

  • [学会発表] C型肝炎ウイルスコア蛋白と相互作用するBnip3を標的としたマイトファジー回復に寄与する化合物の検討2018

    • 著者名/発表者名
      堤武也, 門輝, 奥新和也, 榎奥健一郎, 藤永秀剛, 森屋 恭爾, 四柳宏, 小池和彦.
    • 学会等名
      第54回日本肝臓学会総会

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公開日: 2019-12-27  

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