研究課題
本研究ではMCT9分子標的創薬による新規尿酸降下薬の創製を目指し、(A)MCT9による尿酸輸送特性の更なる解析によるその構造活性相関の解明からの阻害化合物合成、(B)MCT9結合タンパク質同定と輸送制御機構の詳細、の2点の解析を目的とする。平成30年度は主に (A)についての解析を実施した。平成31年度/令和元年度は(A)の研究を継続するとともに、(B)については研究代表者がこれまでに実績を持つ酵母Two-hybrid法を用いた。その中で(1)新規尿酸トランスポーターMCT9の細胞内C末端配列をもつベイトベクターの作成に成功し、(2)ベイトベクターの酵母細胞でのタンパク質発現の確認を行い、(3)MCT9 C末端をベイトとした腎臓cDNAライブラリーのスクリーニングを行った結果、結合タンパク質の候補と思われる陽性クローンの取得に成功した。最終年度となる令和2年度はこれまでの成果の上に立ち、平成30年度に実施した(A)についての継続課題と、平成31年度/令和元年度に実施した(B)についての継続課題に取り組んだ。継続課題(A)では、ほ乳類培養細胞HEK293に、Lipofection法を用いてMCT9遺伝子導入を行って作成したMCT9発現HEK293細胞を用いて、Chiba Chemical Libraryの化合物付加による、MCT9阻害候補化合物スクリーニングを実施したが、これまでのところ、有意な阻害効果を示す化合物の同定には至らなかった。初年度より進めてきたMCT9タンパク質の発現および精製に関しても種々の条件検討を行ったが、少量調整では成功するものの大量調整には至らなかった。継続課題(B)MCT9結合タンパク質候補陽性83クローンの酵母への再導入を行い、17クローンが再び陽性を示したため、この後のシークエンス解析によるタンパク質の同定に向けた酵母プラスミドの調整まで実施した。
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